1-2-7-1- پراکسیداسیون لیپیدی غشای پلاسمایی اسپرم. 13

 

1-2-7-2- اثر روی تحرک اسپرم. 13

 

1-2-8-  ROS و استرس اکسیداتیو مایع منی.. 13

 

1-2-9-  ROS و ناباروری.. 14

 

1-2-10- آنتی اکسیدان­ها 15

 

1-2-10-1- نحوه عملکرد آنتی­اکسیدان­ها به دو روش طبقه بندی میشود: 16

 

1-2-11- اثرات آنتی­اکسیدان­ها 18

 

1-2-11-1- تاثیر بر تحرک اسپرم. 18

 

1-2-11-2- تاثیر بر روی کاهش آسیب­های بعد از انجماد اسپرم. 18

 

1-2-11-3- تاثیر آنتی­اکسیدان­ها در جلوگیری از آسیب بهDNA… 18

 

1-2-12- نقش آنتی­اکسیدان­ها (رباینده­های­بالقوهROS) دراسپرم. 19

 

3-1- ژنتیک و ناباروری مردان.. 20

 

1-3-1- ژن انتخابی مورد مطالعه. 21

 

1-4- اهداف: 22

 

1-5-فرضیات: 22

 

24

 

3-1- تعیین گروه­های آزمایشی.. 30

 

3-2- جمع آوری نمونه­ها و محل انجام آزمایش…. 30

 

3-3- القاء استرس اکسیداتیو با تزریق t-BHP.. 31

 

3-4-  تک سلول کردن بافت بیضه. 31

 

3-5- شمارش تعداد سلول­های زنده در بافت بیضه. 32

 

3-6-1- روش فلوسایتومتری.. 32

 

3-6-2-  سنجش ROS در بیضه بوسیله فلوسایتومتری.. 34

 

3-7- روشهای تعیین آسیب DNA اسپرم. 35

 

3-7-1- تست TUNEL جهت ارزیابی شکست  DNAاسپرم. 36

 

3-7-2- جمع‌آوری سلول‌های اسپرمی جهت آنالیز شکستهای DNA اسپرم. 37

 

3-7-3-  محلولها و بافرهای مورد نیاز جهت روش TUNEL، به منظور ارزیابی شکست DNA اسپرم. 39

 

3-7-4- مراحل انجام آزمایش TUNEL.. 39

 

3-7-5- نحوه استفاده از کیت TUNEL.. 40

 

. 40

 

3-8-1- استخراج RNA به روش ترایزول.. 41

 

3-8-2- بررسی کیفی RNAهای استخراج شده به وسیله الکتروفورز روی ژل آگارز 42

 

3-8-3- تیمار کردن نمونه­های RNAی استخراج شده 43

 

3-8-4-  سنتزDNA  مکمل (cDNA) از روی الگوی RNA… 44

 

3-8-5- روش انجام واکنش زنجیرهای پلی مراز (PCR) جهت اطمینان از سنتز cDNA… 46

 

3-8-6-روش تهیه­ی ژل آگارز و انجام الکتروفورز 48

 

3-8-7- طرز تهیه­ی محلول­ها 48

 

1- بافر50x TAE.. 48

 

2- محلول رنگ آمیزی اتیدیوم برماید (10mg/ml) 48

 

3-8-8- بررسی کمی بیان ژن با استفاده از روش واکنش زنجیرهای پلیمرازپیوسته. 49

 

مقایس­های برای کمی سازی نسبی.. 50

مقالات و پایان نامه ارشد

 

 

3-8-6- آنالیز آماری.. 52

 

   

 

4-1-  بررسی وزن بدن و بافت بیضه پس از 14 روز تزریق.. 54

 

4-2- بررسی ماکروسکوپی بافت بیضه. 55

 

4-3- بررسی میزان ROS در بیضه­ی گروه کنترل و آزمون.. 56

 

56

 

4-4-  نتایج ارزیابی شکست DNA اسپرم با تست TUNEL.. 59

 

در بافت بیضه. 61

 

4-5-1- استخراج RNA کل از بافت بیضه. 61

 

4-5-2- بررسی صحت سنتز cDNA… 62

 

در بافت بیضه. 63

 

5-1- بحث و نتیجه گیری کلی.. 67

 

5-2- پیشنهادات: 70

 

فهرست جداول

 

عنوان                                                                     صفحه

 

جدول 1-1: انواع آنتی­اکسیدان­ها و مکانیسم عملکرد آنها 17

 

جدول 3-1: ترکیب محیط TCM…. 38

 

جدول 3-2: ترکیب محیط 38

 

جدول 3-3: ژن مورد نظر و توالی پرایمر مورد استفاده 40

 

جدول 3-4: مواد مورد استفاده در تیمار نمونه­هایRNA… 43

 

جدول 3-5: مواد مورد استفاده در سنتزcDNA… 45

 

جدول 3-6: برنامه دمایی سنتز cDNA… 45

 

جدول 3-7: مواد مورد استفاده در RT-PCR… 47

 

جدول 3-8: برنامه دمایی RT-PCR و تعداد سیکل­های هر مرحله. 47

 

جدول 3-9: اجزای لازم برای انجام واكنش  Real-Time PCR… 51

 

جدول 3-10: برنامه دمایی Real-Time PCR… 51

 

جدول 4-1: میانگین وزن بدن در طول تزریق و بافت بیضه پس از 14 روز تزریق.. 54

 

جدول 4-2: میزان درصد H2O2 و O2 موجود در دو گروه کنترل و آزمون در نمونه­های بیضه­ای با استفاده از تکنیک فلوسایتومتری.. 58

 

جدول 4-3: درصد شکست DNA اسپرم با روش TUNEL در گروه کنترل و آزمون.. 60

 

.. 64

 

جدول 4-5: آنالیز نتایج  Real-Time PCR با استفاده از نرم افزار REST.. 64

 

فهرست اشکال

 

عنوان                                                                                                صفحه

 

شکل 1-1: ارتباط بین  ATMو P53 در پاسخ­های ترمیم DNA یا آپوپتوز حاصل از آسیب ایجاد شده توسط استرس اکسیداتیو. 9

 

شکل 1-2: ارتباط بین افزایش تولید ROS با ناباروری.. 15

 

-MSH5.. 21

 

شکل 3-1: شمایی از لام نئوبار 32

 

شکل 3-2: DCFH-DA و مکانیسم عمل آن.. 34

 

شکل 3-3: روش­های ارزیابی شکست DNA و نحوه تشخیص آن­ها 36

 

شکل3-4: اساس روش TUNEL.. 37

 

موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت


فرم در حال بارگذاری ...