1-2-7-1- پراکسیداسیون لیپیدی غشای پلاسمایی اسپرم. 13

1-2-7-2- اثر روی تحرک اسپرم. 13

1-2-8- ROS و استرس اکسیداتیو مایع منی.. 13

1-2-9- ROS و ناباروری.. 14

1-2-10- آنتی اکسیدانها 15

1-2-10-1- نحوه عملکرد آنتیاکسیدانها به دو روش طبقه بندی میشود: 16

1-2-11- اثرات آنتیاکسیدانها 18

1-2-11-1- تاثیر بر تحرک اسپرم. 18

1-2-11-2- تاثیر بر روی کاهش آسیبهای بعد از انجماد اسپرم. 18

1-2-11-3- تاثیر آنتیاکسیدانها در جلوگیری از آسیب بهDNA… 18

1-2-12- نقش آنتیاکسیدانها (ربایندههایبالقوهROS) دراسپرم. 19

3-1- ژنتیک و ناباروری مردان.. 20

1-3-1- ژن انتخابی مورد مطالعه. 21

1-4- اهداف: 22

1-5-فرضیات: 22

3-1- تعیین گروههای آزمایشی.. 30

3-2- جمع آوری نمونهها و محل انجام آزمایش…. 30

3-3- القاء استرس اکسیداتیو با تزریق t-BHP.. 31

3-4- تک سلول کردن بافت بیضه. 31

3-5- شمارش تعداد سلولهای زنده در بافت بیضه. 32

3-6-1- روش فلوسایتومتری.. 32

3-6-2- سنجش ROS در بیضه بوسیله فلوسایتومتری.. 34

3-7- روشهای تعیین آسیب DNA اسپرم. 35

3-7-1- تست TUNEL جهت ارزیابی شکست DNAاسپرم. 36

3-7-2- جمع‌آوری سلول‌های اسپرمی جهت آنالیز شکستهای DNA اسپرم. 37

3-7-3- محلولها و بافرهای مورد نیاز جهت روش TUNEL، به منظور ارزیابی شکست DNA اسپرم. 39

3-7-4- مراحل انجام آزمایش TUNEL.. 39

3-7-5- نحوه استفاده از کیت TUNEL.. 40

. 40

3-8-1- استخراج RNA به روش ترایزول.. 41

3-8-2- بررسی کیفی RNAهای استخراج شده به وسیله الکتروفورز روی ژل آگارز 42

3-8-3- تیمار کردن نمونههای RNAی استخراج شده 43

3-8-4- سنتزDNA مکمل (cDNA) از روی الگوی RNA… 44

3-8-5- روش انجام واکنش زنجیرهای پلی مراز (PCR) جهت اطمینان از سنتز cDNA… 46

3-8-6-روش تهیهی ژل آگارز و انجام الکتروفورز 48

3-8-7- طرز تهیهی محلولها 48

1- بافر50x TAE.. 48

2- محلول رنگ آمیزی اتیدیوم برماید (10mg/ml) 48

3-8-8- بررسی کمی بیان ژن با استفاده از روش واکنش زنجیرهای پلیمرازپیوسته. 49

مقایسهای برای کمی سازی نسبی.. 50

3-8-6- آنالیز آماری.. 52

4-1- بررسی وزن بدن و بافت بیضه پس از 14 روز تزریق.. 54

4-2- بررسی ماکروسکوپی بافت بیضه. 55

4-3- بررسی میزان ROS در بیضهی گروه کنترل و آزمون.. 56

4-4- نتایج ارزیابی شکست DNA اسپرم با تست TUNEL.. 59

در بافت بیضه. 61

4-5-1- استخراج RNA کل از بافت بیضه. 61

4-5-2- بررسی صحت سنتز cDNA… 62

در بافت بیضه. 63

5-1- بحث و نتیجه گیری کلی.. 67

5-2- پیشنهادات: 70

فهرست جداول

عنوان صفحه

جدول 1-1: انواع آنتیاکسیدانها و مکانیسم عملکرد آنها 17

جدول 3-1: ترکیب محیط TCM…. 38

جدول 3-2: ترکیب محیط 38

جدول 3-3: ژن مورد نظر و توالی پرایمر مورد استفاده 40

جدول 3-4: مواد مورد استفاده در تیمار نمونههایRNA… 43

جدول 3-5: مواد مورد استفاده در سنتزcDNA… 45

جدول 3-6: برنامه دمایی سنتز cDNA… 45

جدول 3-7: مواد مورد استفاده در RT-PCR… 47

جدول 3-8: برنامه دمایی RT-PCR و تعداد سیکلهای هر مرحله. 47

جدول 3-9: اجزای لازم برای انجام واكنش Real-Time PCR… 51

جدول 3-10: برنامه دمایی Real-Time PCR… 51

جدول 4-1: میانگین وزن بدن در طول تزریق و بافت بیضه پس از 14 روز تزریق.. 54

جدول 4-2: میزان درصد H2O2 و O2 موجود در دو گروه کنترل و آزمون در نمونههای بیضهای با استفاده از تکنیک فلوسایتومتری.. 58

جدول 4-3: درصد شکست DNA اسپرم با روش TUNEL در گروه کنترل و آزمون.. 60

.. 64

جدول 4-5: آنالیز نتایج Real-Time PCR با استفاده از نرم افزار REST.. 64

فهرست اشکال

عنوان صفحه

شکل 1-1: ارتباط بین ATMو P53 در پاسخهای ترمیم DNA یا آپوپتوز حاصل از آسیب ایجاد شده توسط استرس اکسیداتیو. 9

شکل 1-2: ارتباط بین افزایش تولید ROS با ناباروری.. 15

-MSH5.. 21

شکل 3-1: شمایی از لام نئوبار 32

شکل 3-2: DCFH-DA و مکانیسم عمل آن.. 34

شکل 3-3: روشهای ارزیابی شکست DNA و نحوه تشخیص آنها 36

شکل3-4: اساس روش TUNEL.. 37

موضوعات: بدون موضوع لینک ثابت

فرم در حال بارگذاری ...

فید نظر برای این مطلب