عنوان                                                                                                                      صفحه

 

1-3-2-4- روش میسل معکوس…………………………………………………………………………………………………………. 12       

 

1-3-3- تعیین مشخصات نانو ذرات……………………………………………………………………………………………………. 12       

 

1-3-3-1- میکروسکوپ الکترونی……………………………………………………………………………………………………… 12       

 

1-3-3-2- دستگاه دی ال اس(زتا سایزر)…………………………………………………………………………………………… 13       

 

1-4- بیماریهای قارچی فرصت طلب…………………………………………………………………………………………………… 14       

 

1-4-1- کاندیدا آلبیکنس…………………………………………………………………………………………………………………… 14

 

1-4-1-1- مورفولوژی و شناسایی………………………………………………………………………………………………………. 15

 

1-4-1-2- پاتولوژی………………………………………………………………………………………………………………………….. 16

 

1-4-2- کاندیدا گلابراتا…………………………………………………………………………………………………………………….. 17

 

1-4-2-1- موفولوژی و شناسایی………………………………………………………………………………………………………… 18

 

1-4-2-2- پاتولوژی………………………………………………………………………………………………………………………….. 19

 

1-4-3- مالاسزیا فورفور……………………………………………………………………………………………………………………. 19

 

1-4-3-1- موفولوژی و شناسایی………………………………………………………………………………………………………… 20

 

1-4-3-2- پاتولوژی………………………………………………………………………………………………………………………….. 21

 

1-5- داروهای ضد قارچی و مکانیسم اثر آنها………………………………………………………………………………………. 21

 

1-5-1- مکانیسم داروهای ضد قارچی………………………………………………………………………………………………… 22

 

1-5-1-1- مکانیسم اثر ترکیبات آزول و عوارض………………………………………………………………………………… 23

 

1-5-1-2- فلوکونازول………………………………………………………………………………………………………………………. 23       

 

1-5-1-2-1-فعالیت ضد قارچی فلوکونازول در آزمایشگاه…………………………………………………………………… 23

 

 

 

عنوان                                                                                                                           صفحه

 

1-5-1-2-2- جذب فلوکونازول………………………………………………………………………………………………………… 24       

 

1-5-1-2-3-توزیع و جذب فلوکونازول…………………………………………………………………………………………….. 24

 

1-5-1-2-4- متابولیسم و دفع فلوکونازول………………………………………………………………………………………….. 24

 

1-5-1-2-5- اثرات جانبی فلوکونازول………………………………………………………………………………………………. 24

 

1-5-1-2-6- اشکال دارویی فلوکونازول……………………………………………………………………………………………. 25

 

1-5-1-2-7- مصارف کلینیکی فلوکونازول…………………………………………………………………………………………. 25

 

1-5-1-3- کتوکونازول……………………………………………………………………………………………………………………… 25

 

1-5-1-3-1- فعالیت ضد قارچی کتوکوکازول در آزمایشگاه………………………………………………………………… 25

 

1-5-1-3-2- جذب کتوکونازول……………………………………………………………………………………………………….. 26

 

1-5-1-3-3- متابولیسم و حذف کتوکونازول………………………………………………………………………………………. 26

 

1-5-1-3-4- اثرات جانبی کتوکونازول……………………………………………………………………………………………… 26

 

1-5-1-3-5- اشکال دارویی کتوکونازول……………………………………………………………………………………………. 27

 

1-5-1-3-6- مصارف کلینیکی کتوکونازول………………………………………………………………………………………… 27

 

1-5-2- مکانیسم مقاومت دارویی……………………………………………………………………………………………………….. 27

 

1-6- اندازه گیری فعالیت داروهای ضد قارچی در شرایط آزمایشگاهی………………………………………………….. 30

 

1-6-1- انواع تست های حساسیت داروئی………………………………………………………………………………………….. 31

 

1-6-2- روش های استاندارد تست های حساسیت داروئی ………………………………………………………………….. 33

 

فصل دوم: مروری بر تحقیقات انجام شده …………………………………………………………………………………………….. 35

 

فصل سوم:مواد و روش ها …………………………………………………………………………………………………………………… 41

 

 

 

 

عنوان                                                                                                                          صفحه

 

3-1- تهیه مواد و ابزارها در تولید نانوذرات کیتوزان……………………………………………………………………………… 42

 

3-2- تولید نانو ذرات کیتوزان…………………………………………………………………………………………………………….. 43       

 

3-2-1- تهیه سود یک مولار………………………………………………………………………………………………………………. 43

 

3-2-2- تهیه محلول تری پلی فسفات سدیم………………………………………………………………………………………… 43

 

3-2-3- تهیه محلول استوک کیتوزان…………………………………………………………………………………………………… 43

 

3-2-4-تهیه نانو ذرات کیتوزان به روش ژلی شدن یونی……………………………………………………………………….. 43

 

3-2-5- استفاده از دستگاه دی ال اس………………………………………………………………………………………………… 44       

 

3-3- دستگاه ها و مواد مورد استفاده در تعیین حساسیت داروئی…………………………………………………………… 45

 

3-4- آماده سازی محیط کشت……………………………………………………………………………………………………………. 46

 

3-4-1- تهیه محیط سابرود دکستروز آگار…………………………………………………………………………………………… 46

 

3-4-2- تهیه محیط سابرود دکستروز براث………………………………………………………………………………………….. 46

 

3-4-3- تهیه محیط دیکسون آگار تغییر یافته……………………………………………………………………………………….. 47

 

3-4-4- تهیه محیط دیکسون براث تغییر یافته……………………………………………………………………………………… 47

 

3-5- ارگانیسم های مورد استفاده……………………………………………………………………………………………………….. 48

 

3-5-1- تهیه کلنی کاندیدا آلبیکنس،کاندیدا گلابراتا،مالاسزیا فورفور بر روی محیط جامد……………………….. 48

 

3-5-1-1- تهیه سوسپانسیون از آمپول لیوفلیزه……………………………………………………………………………………. 48

 

3-5-1-2- انتقال سوسپانسیون مخمری به محیط کشت جامد……………………………………………………………….. 48

 

3-5-1-3- تهیه کشت تازه و ساب کالچر…………………………………………………………………………………………….. 49       

 

3-5-1-4- بررسی میکروسکوپی مخمرها با لاکتو فنل کاتن بلو…………………………………………………………….. 49

 

 

 

عنوان                                                                                                                          صفحه

 

3-6- انجام تست حساسیت دارویی ……………………………………………………………………………………………………. 49

 

3-6-1- تهیه سوسپانسیون قارچی………………………………………………………………………………………………………. 49

 

3-6-2- تهیه محلول دارویی……………………………………………………………………………………………………………….. 50

 

3-6-3- تهیه محلول نانو ذرات کیتوزان………………………………………………………………………………………………. 51

 

3-7- انجام تست حساسیت دارویی از طریق MIC………………………………………………………………………………. 51

 

3-7-1- تعیین حساسیت مخمرهای مذکور نسبت به فلوکوناوزل،کتوکوناوزل،و نانو کیتوزان…………………….. 51

 

3-7-2- تعیین حساسیت مخمری مذکور نسبت به ترکیب نانو کیتوزان با داروهای آزمون………………………… 52

 

3-8- خواندن نتایج MIC………………………………………………………………………………………………………………….. 52       

 

3-8-1- خواندن نتایج MIC از طریق چشمی……………………………………………………………………………………… 52

 

3-8-2- خواندن نتایج MIC از طریق دستگاه الایزا ریدر……………………………………………………………………… 53

 

3-9- نتیجه گیری و مقایسه داده ها……………………………………………………………………………………………………… 53

 

فصل چهارم: نتایج………………………………………………………………………………………………………………………………. 54

 

فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری……………………………………………………………………………………………………………71

 

پیشنهادات: ………………………………………………………………………………………………………………………………………..79

 

فهرست منابع فارسی: …………………………………………………………………………………………………………………………80

 

فهرست منابع انگلیسی:…………………………………………………………………………………………………………………………82

 

چکیده انگلیسی:………………………………………………………………………………………………………………………………….89

 

 

 

                                                            فهرست جداول

 

عنوان                                                                                                               صفحه

 

فصل سوم:مواد و روش ها……………………………………………………………………………………………………………………. 41

 

جدول(3-1) دستگاه‏های مورد استفاده در تولید نانو کیتوزان………………………………………………………………….. 42

 

جدول(3-2) مواد مورد نیاز در سنتز نانو کیتوزان………………………………………………………………………………….. 42

 

جدول(3-3) دستگاه‏های مورد استفاده در تعیین حساسیت داروئی…………………………………………………………. 45

 

جدول(3-4) محیط کشت‏های مورد استفاده………………………………………………………………………………………….. 45

 

جدول(3-5) مواد شیمیایی مورد استفاده………………………………………………………………………………………………. 46

 

جدول(3-6) مخمرهای مورد استفاده در آزمایش…………………………………………………………………………………… 48

 

فصل چهارم:نتایج………………………………………………………………………………………………………………………………. 54

 

جدول(4-1) نتایج اندازه گیری سایز نانو کیتوزان…………………………………………………………………………………. 55

 

جدول(4-2) نتایج حاصل از اندازه گیری پتانسیل زتا نانو ذرات کیتوزان………………………………………………… 56

 

جدول(4-3) شمارش تعداد CFU مخمرهای آزمون در برابر داروی فلوکونازول………………………………………. 58

 

جدول(4-4) تعیین میزان MIC50 و MIC90 داروی فلوکونازول در برابر مخمرهای مورد آزمون……………. 58

 

جدول(4-5) شمارش تعداد کلنی مخمرهای در برابر کتوکونازول…………………………………………………………… 59

 

جدول(4-6) تعیین میزان MIC50 و MIC90 داروی کتوکونازول در برابر مخمرهای مورد آزمون……………. 59

 

جدول(4-7)شمارش تعداد کلنی های CFU مخمرهای آزمون در برابر نانو کیتوزان………………………………….. ..60

 

جدول(4-8)تعیین میزان MIC50 و MIC90داروی نانو کیتوزان در برابر مخمرهای آزمون……………………… .60

 

جدول(4-9) شمارش تعداد کلنی CFU مخمرهای آزمون در برابر اثر ترکیب نانوکیتوزان و فلوکونازول…….. 61

 

جدول(4-10) تعیین میزان MIC50 و MIC90ترکیب نانو کیتوزان و فلوکونازول در برابر مخمرهای آزمون 61

 

جدول(4-11)شمارش تعداد کلنی CFU مخمرهای مورد آزمون در اثر ترکیب نانو کیتوزان و کتوکونازول….. 62

 

جدول(4-12)تعیین میزان MIC50 و MIC90ترکیب نانو کیتوزان و کتوکونازول در برابر مخمرهای آزمون. 62       

 

 

 

عنوان                                                                                                                       فهرست

 

جدول(4-13) نتایج آزمون آنالیز واریانس برای مقایسه تعداد کلنی مخمرهای مورد آزمون در حضور داروهای مختلف به صورت تکی و در ترکیب…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 63

 

جدول(4-14) نتایج آزمون آنالیز واریانس برای مقایسه تاثیر داروها بر مخمرهای آزمون…………………………… 67

 

جدول(4-15) مقایسه تعداد کلونی در غلظت های مختلف ترکیب نانو کیتوزان با گروه شاهد ………………….. 68

 

جد.ول(4-16) مقایسه تعداد کلونی در غلظت های مختلف ترکیب نانو کیتوزان و فلوکونازول با گروه شاهد. 69

 

جد.ل4-17)مقایسه تعداد کلنی در غلظت های مختلف ترکیب نانو کیتوزان و کتوکونازول با گروه شاهد…….. 70
                                     فهرست نمودارها

 

عنوان                                                                                                                 صفحه

 

نمودار(4-1) محدوده جذب برای کاندیدا گلابراتا………………………………………………………………………………… 57

 

نمودار(4-2) محدوده جذب برای کاندیدا آلبیکنس……………………………………………………………………………….. 57

 

نمودار(5-2)محدوده جذب برای مالاسزیا…………………………………………………………………………………………….. 57
                                       فهرست شکل ها

 

عنوان                                                                                                  صفحه

 

فصل اول:کلیات………………………………………………………………………………………………………………………………… 2

 

شکل(1-1)تبدیل کیتین به کیتوزان………………………………………………………………………………………………………. 8

 

شکل(1-2) واکنش بین کیتوزان و تری پلی فسفات سدیم……………………………………………………………………… 11

 

شکل(1-3) موفولوژی کاندیدا آلبیکنس………………………………………………………………………………………………… 16

 

شکل(1-4) موفولوژی کاندیداگلابراتا…………………………………………………………………………………………………… 18

 

شکل(1-5)موفولوژی مالاسزیا فورفور………………………………………………………………………………………………….. 20

 

فصل سوم:مواد و روش‏ها…………………………………………………………………………………………………………………….. 41

 

شکل(3-1) مراحل تولید نانو کیتوزان…………………………………………………………………………………………………… 44

 

شکل(3-2) الف:اولتراسونیک ب:زتا سایزر ج:فریز درایر……………………………………………………………………….. 44

 

شکل(3-3) محیط کشت مورد استفاده………………………………………………………………………………………………….. 47

 

شکل(3-4) محلول های داروئی در رقت های مورد نیاز…………………………………………………………………………. 50

 

شکل(3-5) میکروپلیت های 96 خانه ای……………………………………………………………………………………………… 52

 

شکل(3-6) خواندن میکروپلیت 96 خانه ای توسط دستگاه الایزا ریدر………………………………………………….. 53

 

شکل(3-7) پلیت های مخمرهای مورد آزمایش……………………………………………………………………………………… 53

 

 

 

چکیده: