اندوتوکسین |
1-4-9. اندوتوکسین………………………………………………………………………………………………………………………………… 19
1-5. سویه های بوردتلا پرتوسیس ………………………………………………………………………………………………………… 19
1-6. اپیدمیولوژی ……………………………………………………………………………………………………………………………………. 20
1-6-1. وضعیت بیماری در ایران……………………………………………………………………………………………………………. 21
1-7. بیماری زایی سیاه سرفه ………………………………………………………………………………………………………………. 21
1-8. علائم کلینیکی ………………………………………………………………………………………………………………………………. 22
1-9. تشخیص بیماری …………………………………………………………………………………………………………………………….. 23
1-9-1. تشخیص بالینی………………………………………………………………………………………………………………………….. 23
1-9-2. علائم کلینیکی در نوزادان…………………………………………………………………………………………………………. 24
1-9-3. کودکان، نوجوانان و بزرگسالان………………………………………………………………………………………………….. 25
1-10. پاسخ ایمنی در برابر سیاه سرفه ………………………………………………………………………………………………… 26
1-10-1. پاسخ ایمنی همورال………………………………………………………………………………………………………………… 27
1-10-2. پاسخ ایمنی سلولی…………………………………………………………………………………………………………………. 28
1-11. روش های آزمایشگاهی تشخیص………………………………………………………………………………………………… 30
1-11-1. کشت………………………………………………………………………………………………………………………………………… 30
1-11-2. سرولوژی………………………………………………………………………………………………………………………………….. 30
1-11-3. PCR …………………………………………………………………………………………………………………………………….. 32
1-12. مدیریت بیماری…………………………………………………………………………………………………………………………….. 33
1-13. پیشگیری …………………………………………………………………………………………………………………………………….. 34
1-13-1. راهبردهای بالقوه در مهار بیماری سیاه سرفه در اوایل نوزادی……………………………………………. 35
1-13-1-1. واکسیناسیون بالغین و سالمندان……………………………………………………………………………………… 37
1-13-1-2. حفاظت غیرمستقیم نوزادان از طریق واکسیناسیون والدین………………………………………….. 37
1-13-1-3. ایمن سازی نوزادان و کودکان…………………………………………………………………………………………… 38
1-13-1-4. واکسیناسیون مادر در دوران بارداری……………………………………………………………………………….. 38
1-14. استراتژی های واکسن………………………………………………………………………………………………………………….. 39
1-14-1. واکسن غیر سلولی سیاه سرفه………………………………………………………………………………………………. 39
1-14-2. واکسن سلولی سیاه سرفه………………………………………………………………………………………………………. 40
فصل دوم: مروری بر متون گذشته
2-1. تاریخچه تولید واکسن سیاه سرفه…………………………………………………………………………………………………. 42
2-1-1. تعریف تست كنترل سمیت زدایی (MWGT) ……………………………………………………………………. 43
2-1-2. تعریف تست حفاظتی داخل مغزی موش (تست توانمندی Potency test) …………………… 44
2-1-3. ابداع روش کشت……………………………………………………………………………………………………………………….. 44
2-1-4. جداسازی سلول باکتری از کشت……………………………………………………………………………………………… 45
2-2. تاریخچه تولید واکسن سیاه سرفه در انستیتو رازی…………………………………………………………………….. 46
2-3. غیرفعال سازی سوسپانسیون سلولی باکتری سیاه سرفه…………………………………………………………….. 47
2-3-1. استفاده از فرمالین و تیومرسال برای سمیت زدایی سوسپانسیون سلولی سیاه سرفه…………. 47
2-3-2. استفاده از گلوتار آلدهید برای سمیت زدایی سوسپانسیون سلولی سیاه سرفه……………………. 49
2-3-3. استفاده از حرارت برای سمیت زدایی سوسپانسیون سلولی سیاه سرفه……………………………….. 49
فصل سوم: مواد و روش ها
3-1. تجهیزات و وسایل ………………………………………………………………………………………………………………………….. 51
3-2. مواد و محیط ها ……………………………………………………………………………………………………………………………… 52
3-2-1. محیط کشت آگار بورده ژانگو……………………………………………………………………………………………………. 52
3-2-2. محیط کشت وِروِی…………………………………………………………………………………………………………………….. 53
3-2-3. محیط B2…………………………………………………………………………………………………………………………………… 54
3-2-4. محیط کشت سویابین کازئین…………………………………………………………………………………………………… 54
3-2-5. محیط تیوگلیکولات براث………………………………………………………………………………………………………….. 55
3-3. روش کار …………………………………………………………………………………………………………………………………………. 56
3-3-1. انتخاب سویه های بوردتلا پرتوسیس……………………………………………………………………………………….. 56
3-3-1-1. لیوفیلیزه کردن……………………………………………………………………………………………………………………… 56
3-3-2. کشت باکتری سیاه سرفه………………………………………………………………………………………………………….. 56
3-3-2-1. کشت تجدید حیات روی محیط بورده ژانگو………………………………………………………………………. 56
3-3-2-2. کشت بذر روی محیط وِروِی………………………………………………………………………………………………… 57
3-3-2-3. مراحل انجام کشت فرمانتوری باکتری سیاه سرفه…………………………………………………………….. 57
3-3-2-3-1. استریلیزاسیون فرمانتور…………………………………………………………………………………………………… 57
3-3-2-3-2. آماده سازی و بهینه سازی محیط کشت فرمانتوری……………………………………………………… 58
3-3-2-3-3. تلقیح بذر به محیط کشت در فرمانتور…………………………………………………………………………… 58
3-3-3. جداسازی باکتری سیاه سرفه از محیط کشت…………………………………………………………………………. 59
3-3-3-1. جداسازی سلول باکتری با استفاده از سانتریفوژ…………………………………………………………………. 59
3-3-3-2. جداسازی سلول باکتری با استفاده از سیستم میکرو فیلتراسیون……………………………………. 59
3-3-4. غیرفعال سازی سلول باکتری سیاه سرفه………………………………………………………………………………… 60
3-3-5. سمیت زدایی سوسپانسیون باکتری سیاه سرفه………………………………………………………………………. 60
3-3-5-1. سمیت زدایی با استفاده از فرمالین……………………………………………………………………………………… 61
3-3-5-2. سمیت زدایی با استفاده از تیومرسال………………………………………………………………………………….. 61
3-3-6. تست های کنترلی سوسپانسیون سیاه سرفه…………………………………………………………………………… 61
3-3-6-1. تست استریلیتی……………………………………………………………………………………………………………………. 61
3-3-6-2. تست کنترل غیرفعال بودن باكتری…………………………………………………………………………………….. 62
3-3-6-3. تست کنترل سمیت زدایی (MWGT) …………………………………………………………………………… 62
3-3-6-4. تست توانمندی……………………………………………………………………………………………………………………… 62
فصل چهارم: نتایج
4-1. تجدید حیات بذر بر روی محیط بورده ژانگو………………………………………………………………………………… 64
4-2. تهیه بذر در محیط وِروِی……………………………………………………………………………………………………………….. 64
4-3. کشت فرمانتوری باکتری سیاه سرفه برای تولید واکسن……………………………………………………………… 64
4-4. جداسازی باکتری سیاه سرفه از کشت………………………………………………………………………………………….. 67
4-5. غیرفعال سازی و سمیت زدایی باکتری سیاه سرفه برای تولید واکسن……………………………………… 69
4-5-1. سمیت زدایی با فرمالین…………………………………………………………………………………………………………….. 69
4-5-2. سمیت زدایی با تیومرسال…………………………………………………………………………………………………………. 69
4-6. آزمایش های کنترلی سوسپانسیون های سیاه سرفه……………………………………………………………………. 69
4-7. نتایج حاصل از آزمون MWG در کنترل توکسیسیتی سوسپانسیون های سلولی سیاه سرفه
سمیت زدایی شده با فرمالین و تیومرسال…………………………………………………………………………………………….. 72
4-8. آزمون MWG و مقایسه تغییرات اوزان موش ها……………………………………………………………………….. 75
4-9. تست توانمندی واکسن های آزمایشی سیاه سرفه……………………………………………………………………….. 80
فصل پنجم: بحث و پیشنهادات
بحث ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 83
نتیجه گیری و پیشنهادات ………………………………………………………………………………………………………………………. 88
منابع………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 89
خلاصه انگلیسی ……………………………………………………………………………………………………………………………………. 97
ضمایم ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 98
فهرست جداول
عنوان صفحه
جدول1-1. آنتی ژن های مختلف سیاه سرفه…………………………………………………………………………………………… 9
جدول1-2. علائم کلینیکی بیماری سیاه سرفه……………………………………………………………………………………… 26
جدول1-3. آنتی بیوتیک های مورد استفاده در درمان سیاه سرفه حاد و رژیم مصرف آن……………….. 34
جدول1-4. واکسیناسیون سیاه سرفه در کشورهای مختلف…………………………………………………………………. 36
جدول2-1. ترکیب محیط لیستر و B2 بر اساس گرم در لیتر…………………………………………………………….. 45
جدول3-1. لیست دستگاه ها و تجهیزات مورد استفاده………………………………………………………………………… 51
جدول3-2. لیست مواد و محیط های مورد استفاده در تولید واکسن سیاه سرفه………………………………. 52
جدول3-3. ترکیبات محیط بورده ژانگو………………………………………………………………………………………………….. 53
جدول3-4. ترکیبات محیط کشت وِروِی………………………………………………………………………………………………… 53
جدول3-5. ترکیبات محیط کشت B2…………………………………………………………………………………………………… 54
جدول3-6. ترکیبات محیط کشت سویابین کازئین………………………………………………………………………………. 55
جدول4-1. اطلاعات دوره كشت باكتری سیاه سرفه برای تولید واكسن…………………………………………….. 68
جدول4-2. نتایج حاصل از انجام آزمایش های غیرفعال سازی و استریلیتی سوسپانسیون های باكتری سیاه سرفه سمیت زدایی شده با فرمالین……………………………………………………………………………………………………………………………….. 70
جدول4-3. نتایج حاصل از انجام آزمایش های غیرفعال سازی و استریلیتی سوسپانسیون های باكتری سیاه سرفه سمیت زدایی شده با تیومرسال…………………………………………………………………………………………………………………………….. 71
جدول4-4. نتایج حاصل از کنترل توکسیسیتی سوسپانسیون های سمیت زدایی شده با فرمالین و تیومرسال با استفاده از آزمون MWG………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 73
جدول4-5. نتایج كنترل توکسیسیتی سوسپانسیون های سمیت زدایی شده با فرمالین با استفاده از آزمون MWG 76
جدول4-6. نتایج كنترل توکسیسیتی سوسپانسیون های سمیت زدایی شده با تیومرسال با استفاده از آزمون MWG 77
جدول4-7. نتایج حاصل از انجام تست توانمندی برای شش واکسن تجربی سمیت زدایی شده با فرمالین (FDV) 80
جدول4-8. نتایج حاصل از انجام تست توانمندی برای شش واکسن تجربی سمیت زدایی شده با تیومرسال (TDV) 81
فهرست نمودارها
عنوان صفحه
نمودار1-1. مقایسه تعداد افراد زیر یک سال ایمن شده با واکسن DTP در سه کشور مختلف در سال
2000 تا 2010 ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 6
نمودار4-1. تغییرات pH کشت سویه 134 از باکتری سیاه سرفه در طول دوره رشد درفرمانتور….. 65
نمودار4-2. تغییرات pH کشت سویه 509 از باکتری سیاه سرفه در طول دوره رشد درفرمانتور….. 65
نمودار4-3. مقایسهی میانگین جذب نوری در طول موج های530 و590 در مقدار جرم باكتری در هنگام برداشت در بچ های مختلف سویه 134 و 509……………………………………………………………………………………………………………… 66
نمودار4-4. مقدار غلظت نهایی باكتری سیاه سرفه (cell109×1) سویه 134 در پایان دوره كشت در هنگام برداشت 66
نمودار4-5. مقدار غلظت نهایی باكتری سیاه سرفه (cell109×1) سویه 509 در پایان دوره كشت در هنگام برداشت 67
نمودار4-6. مقایسه دوره ی سمیت زدایی سوسپانسیون های سلولی سیاه سرفه سویه 134 توسط فرمالین و تیومرسال با استفاده از تست MWG ……………………………………………………………………………………………………………………….. 74
نمودار4-7. مقایسه دوره ی سمیت زدایی سوسپانسیون های سلولی سیاه سرفه در سویه 509 توسط فرمالین و تیومرسال با استفاده از تست MWG……………………………………………………………………………………………………………………….. 74
نمودار4-8. مقایسه اختلاف وزن موش های تزریق شده با واكسن تجربی سمیت زدایی شده با فرمالین نسبت به تیومرسال در سویه 134……………………………………………………………………………………………………………………………………………. 78
نمودار4-9. مقایسه اختلاف وزن موش های تزریق شده با واكسن تجربی سمیت زدایی شده با فرمالین
نسبت به تیومرسال در سویه 509………………………………………………………………………………………………………. 78
نمودار4-10. مقایسه اختلاف وزن موش های تزریق شده با سوسپانسیون های سمیت زدایی شده سویه 134 با تیومرسال و فرمالین نسبت به موش های گروه كنترل……………………………………………………………………………………………….. 79
فرم در حال بارگذاری ...
[سه شنبه 1399-10-09] [ 04:50:00 ب.ظ ]
|