1-4-8. BrKA………………………………………………………………………………………………………………………………………. 18

 

1-4-9. اندوتوکسین………………………………………………………………………………………………………………………………… 19

 

1-5. سویه های بوردتلا پرتوسیس ………………………………………………………………………………………………………… 19

 

1-6. اپیدمیولوژی ……………………………………………………………………………………………………………………………………. 20

 

1-6-1. وضعیت بیماری در ایران……………………………………………………………………………………………………………. 21

 

1-7. بیماری زایی سیاه سرفه  ………………………………………………………………………………………………………………. 21

 

1-8. علائم کلینیکی ………………………………………………………………………………………………………………………………. 22

 

1-9. تشخیص بیماری …………………………………………………………………………………………………………………………….. 23

 

1-9-1. تشخیص بالینی………………………………………………………………………………………………………………………….. 23

 

1-9-2. علائم کلینیکی در نوزادان…………………………………………………………………………………………………………. 24

 

1-9-3. کودکان، نوجوانان و بزرگسالان………………………………………………………………………………………………….. 25

 

1-10. پاسخ ایمنی در برابر سیاه سرفه ………………………………………………………………………………………………… 26

 

1-10-1. پاسخ ایمنی همورال………………………………………………………………………………………………………………… 27

 

1-10-2. پاسخ ایمنی سلولی…………………………………………………………………………………………………………………. 28

 

1-11. روش های آزمایشگاهی تشخیص………………………………………………………………………………………………… 30

 

1-11-1. کشت………………………………………………………………………………………………………………………………………… 30

 

1-11-2. سرولوژی………………………………………………………………………………………………………………………………….. 30

 

1-11-3. PCR …………………………………………………………………………………………………………………………………….. 32

 

1-12. مدیریت بیماری…………………………………………………………………………………………………………………………….. 33

 

1-13. پیشگیری …………………………………………………………………………………………………………………………………….. 34

 

1-13-1. راهبردهای بالقوه در مهار بیماری سیاه سرفه در اوایل نوزادی……………………………………………. 35

 

1-13-1-1. واکسیناسیون بالغین و سالمندان……………………………………………………………………………………… 37

 

1-13-1-2. حفاظت غیرمستقیم نوزادان از طریق واکسیناسیون والدین………………………………………….. 37

 

1-13-1-3. ایمن سازی نوزادان و کودکان…………………………………………………………………………………………… 38

 

1-13-1-4. واکسیناسیون مادر در دوران بارداری……………………………………………………………………………….. 38

 

1-14. استراتژی های واکسن………………………………………………………………………………………………………………….. 39

 

1-14-1. واکسن غیر سلولی سیاه سرفه………………………………………………………………………………………………. 39

 

1-14-2. واکسن سلولی سیاه سرفه………………………………………………………………………………………………………. 40

 

فصل دوم: مروری بر متون گذشته

 

2-1. تاریخچه تولید واکسن سیاه سرفه…………………………………………………………………………………………………. 42

 

2-1-1. تعریف تست كنترل سمیت زدایی (MWGT) ……………………………………………………………………. 43

 

2-1-2. تعریف تست حفاظتی داخل مغزی موش (تست توانمندی Potency test) …………………… 44

 

2-1-3. ابداع روش کشت……………………………………………………………………………………………………………………….. 44

 

2-1-4. جداسازی سلول باکتری از کشت……………………………………………………………………………………………… 45

 

2-2. تاریخچه تولید واکسن سیاه سرفه در انستیتو رازی…………………………………………………………………….. 46

 

2-3. غیرفعال سازی سوسپانسیون سلولی باکتری سیاه سرفه…………………………………………………………….. 47

 

2-3-1. استفاده از فرمالین و تیومرسال برای سمیت زدایی سوسپانسیون سلولی سیاه سرفه…………. 47

 

2-3-2. استفاده از گلوتار آلدهید برای سمیت زدایی سوسپانسیون سلولی سیاه سرفه……………………. 49

 

2-3-3. استفاده از حرارت برای سمیت زدایی سوسپانسیون سلولی سیاه سرفه……………………………….. 49

 

فصل سوم: مواد و روش ها

 

3-1. تجهیزات و وسایل ………………………………………………………………………………………………………………………….. 51

 

3-2. مواد و محیط ها ……………………………………………………………………………………………………………………………… 52

 

3-2-1. محیط کشت آگار بورده ژانگو……………………………………………………………………………………………………. 52

 

3-2-2. محیط کشت وِروِی…………………………………………………………………………………………………………………….. 53

 

3-2-3. محیط B2…………………………………………………………………………………………………………………………………… 54

 

3-2-4. محیط کشت سویابین کازئین…………………………………………………………………………………………………… 54

 

3-2-5. محیط تیوگلیکولات براث………………………………………………………………………………………………………….. 55

 

3-3. روش کار …………………………………………………………………………………………………………………………………………. 56

 

3-3-1. انتخاب سویه های بوردتلا پرتوسیس……………………………………………………………………………………….. 56

 

3-3-1-1. لیوفیلیزه کردن……………………………………………………………………………………………………………………… 56

 

3-3-2. کشت باکتری سیاه سرفه………………………………………………………………………………………………………….. 56

 

3-3-2-1. کشت تجدید حیات روی محیط بورده ژانگو………………………………………………………………………. 56

 

3-3-2-2. کشت بذر روی محیط وِروِی………………………………………………………………………………………………… 57

 

3-3-2-3. مراحل انجام کشت فرمانتوری باکتری سیاه سرفه…………………………………………………………….. 57

 

3-3-2-3-1. استریلیزاسیون فرمانتور…………………………………………………………………………………………………… 57

 

3-3-2-3-2. آماده سازی و بهینه سازی محیط کشت فرمانتوری……………………………………………………… 58

 

3-3-2-3-3. تلقیح بذر به محیط کشت در فرمانتور…………………………………………………………………………… 58

 

3-3-3. جداسازی باکتری سیاه سرفه از محیط کشت…………………………………………………………………………. 59

 

3-3-3-1. جداسازی سلول باکتری با استفاده از سانتریفوژ…………………………………………………………………. 59

 

3-3-3-2. جداسازی سلول باکتری با استفاده از سیستم میکرو فیلتراسیون……………………………………. 59

 

3-3-4. غیرفعال سازی سلول باکتری سیاه سرفه………………………………………………………………………………… 60

 

3-3-5. سمیت زدایی سوسپانسیون باکتری سیاه سرفه………………………………………………………………………. 60

 

3-3-5-1. سمیت زدایی با استفاده از فرمالین……………………………………………………………………………………… 61

 

3-3-5-2. سمیت زدایی با استفاده از تیومرسال………………………………………………………………………………….. 61

 

3-3-6. تست های کنترلی سوسپانسیون سیاه سرفه…………………………………………………………………………… 61

 

3-3-6-1. تست استریلیتی……………………………………………………………………………………………………………………. 61

 

3-3-6-2. تست کنترل غیرفعال بودن باكتری…………………………………………………………………………………….. 62

 

3-3-6-3. تست کنترل سمیت زدایی (MWGT) …………………………………………………………………………… 62

 

3-3-6-4. تست توانمندی……………………………………………………………………………………………………………………… 62

 

فصل چهارم: نتایج

 

4-1. تجدید حیات بذر بر روی محیط بورده ژانگو………………………………………………………………………………… 64

 

4-2. تهیه بذر در محیط وِروِی……………………………………………………………………………………………………………….. 64

 

4-3. کشت فرمانتوری باکتری سیاه سرفه برای تولید واکسن……………………………………………………………… 64

 

4-4. جداسازی باکتری سیاه سرفه از کشت………………………………………………………………………………………….. 67

 

4-5. غیرفعال سازی و سمیت زدایی باکتری سیاه سرفه برای تولید واکسن……………………………………… 69

 

4-5-1. سمیت زدایی با فرمالین…………………………………………………………………………………………………………….. 69

 

4-5-2. سمیت زدایی با تیومرسال…………………………………………………………………………………………………………. 69

 

4-6. آزمایش های کنترلی سوسپانسیون های سیاه سرفه……………………………………………………………………. 69

 

4-7. نتایج حاصل از آزمون MWG در کنترل توکسیسیتی سوسپانسیون های سلولی سیاه سرفه

 

سمیت زدایی شده با فرمالین و تیومرسال…………………………………………………………………………………………….. 72

 

4-8. آزمون MWG و مقایسه تغییرات اوزان موش ها……………………………………………………………………….. 75

 

4-9. تست توانمندی واکسن های آزمایشی سیاه سرفه……………………………………………………………………….. 80

 

فصل پنجم: بحث و پیشنهادات

 

بحث ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 83

 

نتیجه گیری و پیشنهادات ………………………………………………………………………………………………………………………. 88

 

منابع………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 89

 

خلاصه انگلیسی ……………………………………………………………………………………………………………………………………. 97

 

ضمایم ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 98

 

 فهرست جداول

 

عنوان                                                                                                                             صفحه

 

جدول1-1. آنتی ژن های مختلف سیاه سرفه…………………………………………………………………………………………… 9

 

جدول1-2. علائم کلینیکی بیماری سیاه سرفه……………………………………………………………………………………… 26

 

جدول1-3. آنتی بیوتیک های مورد استفاده در درمان سیاه سرفه حاد و رژیم مصرف آن……………….. 34

 

جدول1-4. واکسیناسیون سیاه سرفه در کشورهای مختلف…………………………………………………………………. 36

 

جدول2-1. ترکیب محیط لیستر و B2  بر اساس گرم در لیتر…………………………………………………………….. 45

 

جدول3-1. لیست دستگاه ها و تجهیزات مورد استفاده………………………………………………………………………… 51

 

جدول3-2. لیست مواد و محیط های مورد استفاده در تولید واکسن سیاه سرفه………………………………. 52

 

جدول3-3. ترکیبات محیط بورده ژانگو………………………………………………………………………………………………….. 53

 

جدول3-4. ترکیبات محیط کشت وِروِی………………………………………………………………………………………………… 53

 

جدول3-5. ترکیبات محیط کشت B2…………………………………………………………………………………………………… 54

 

جدول3-6. ترکیبات محیط کشت سویابین کازئین………………………………………………………………………………. 55

 

جدول4-1. اطلاعات دوره كشت باكتری سیاه سرفه برای تولید واكسن…………………………………………….. 68

 

جدول4-2. نتایج حاصل از انجام آزمایش های غیرفعال سازی و استریلیتی سوسپانسیون های باكتری  سیاه سرفه سمیت  زدایی شده با فرمالین……………………………………………………………………………………………………………………………….. 70

 

جدول4-3. نتایج حاصل از انجام آزمایش های غیرفعال سازی و استریلیتی سوسپانسیون های باكتری  سیاه سرفه سمیت  زدایی شده با تیومرسال…………………………………………………………………………………………………………………………….. 71

 

جدول4-4. نتایج حاصل از کنترل توکسیسیتی سوسپانسیون های سمیت زدایی شده با فرمالین و تیومرسال با استفاده از آزمون MWG………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 73

 

جدول4-5. نتایج كنترل توکسیسیتی سوسپانسیون های سمیت زدایی شده با فرمالین با استفاده از آزمون MWG   76

 

جدول4-6. نتایج كنترل توکسیسیتی سوسپانسیون های سمیت زدایی شده با تیومرسال با استفاده از آزمون MWG 77

 

جدول4-7. نتایج حاصل از انجام تست توانمندی برای شش واکسن تجربی سمیت زدایی شده با فرمالین (FDV)     80

 

جدول4-8. نتایج حاصل از انجام تست توانمندی برای شش واکسن تجربی سمیت زدایی شده با تیومرسال (TDV)  81

 

 فهرست نمودارها

 

عنوان                                                                                                                صفحه

 

 

 

نمودار1-1. مقایسه تعداد افراد زیر یک سال ایمن شده با واکسن DTP در سه کشور مختلف در سال

 

2000 تا 2010 ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 6

 

نمودار4-1. تغییرات pH کشت سویه 134 از باکتری سیاه سرفه در طول دوره رشد درفرمانتور….. 65

 

نمودار4-2. تغییرات pH کشت سویه 509 از باکتری سیاه سرفه در طول دوره رشد درفرمانتور….. 65

 

نمودار4-3. مقایسه­ی میانگین جذب نوری در طول موج های530 و590 در مقدار جرم  باكتری در هنگام برداشت در بچ های مختلف سویه 134 و 509……………………………………………………………………………………………………………… 66

 

نمودار4-4. مقدار غلظت نهایی باكتری سیاه سرفه (cell109×1) سویه 134 در پایان دوره كشت در هنگام برداشت   66

 

نمودار4-5. مقدار غلظت نهایی باكتری سیاه سرفه (cell109×1) سویه 509 در پایان دوره كشت در هنگام برداشت   67

 

نمودار4-6. مقایسه دوره ی سمیت زدایی سوسپانسیون های سلولی سیاه سرفه  سویه 134  توسط  فرمالین و تیومرسال با استفاده از تست MWG ……………………………………………………………………………………………………………………….. 74

 

نمودار4-7. مقایسه دوره ی سمیت زدایی سوسپانسیون های سلولی  سیاه سرفه در سویه 509 توسط فرمالین و تیومرسال با استفاده از تست  MWG……………………………………………………………………………………………………………………….. 74

 

نمودار4-8. مقایسه اختلاف وزن موش های تزریق شده با واكسن تجربی سمیت زدایی شده با فرمالین نسبت به تیومرسال در سویه 134……………………………………………………………………………………………………………………………………………. 78

 

نمودار4-9. مقایسه اختلاف وزن موش های تزریق شده با واكسن تجربی سمیت زدایی شده با فرمالین

 

نسبت به تیومرسال در سویه  509………………………………………………………………………………………………………. 78

 

نمودار4-10. مقایسه اختلاف وزن موش های تزریق شده با سوسپانسیون های سمیت زدایی شده سویه 134 با تیومرسال و فرمالین نسبت به موش های گروه كنترل……………………………………………………………………………………………….. 79

 

موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت


فرم در حال بارگذاری ...