2-7-1- روشهای اندازه گیری فعالیت آلفاآمیلاز تا قبل از روش رنگ سنجی. 14

2-7-2 – روشهای رنگ سنجی : 15

2-8- معماری دمین های ساختار آلفا آمیلاز (Domain) 15

2-9- ژن های آلفا آمیلاز در انسان 16

2-10- آلفا آمیلاز در موش 18

2-10-1-تفاوت توالی انتهای 5 mRNA های آلفا آمیلاز کبدی و غدد بزاقی موش از لحاظ اندازه 19

2-10-2- مطالعات مربوط به آنالیز توالی mRAN آلفا آمیلاز کبدی. 20

2-10-3- خصوصیات mRAN آلفا آمیلاز کبدی. 20

. 22

فصل سوم مواد و روشها 27

3-1- روش های اجرایی کار : 28

3-1-1- حیوان آزمایشگاهی مورد مطالعه : 28

3-1-1-1-دلایل انتخاب این حیوان به طور خلاصه عبارتند از : 28

3-1-1-2-شرایط نگه داری حیوانات : 28

3-1-2- نوع مطالعه 29

3-2- روش اجرای طرح (چاق کردن موش ها با استفاده از رژیم غذایی با چربی بالا) 29

. 30

3-2-2- جدا سازی کبد و خونگیری از قلب موش.. 30

3-3- استخراج RNA 34

3-3-1- وسایل کار استخراج RNA. 34

3-3-2- مراحل استخراج RNA.. 34

3-3-2-1- رسوب دادن RNA : 35

3-3-2-2- شستشوی RNA : 35

3-3-2-3- خشك كردن رسوب RNA : 35

3-3-3- ارزیابی كمی و كیفی RNA استخراج شده: 36

3-3-3-1- اندازه گیری مقدار RNA : 36

3-3-3-3- حفظ و نگهداری RNA: 37

3-4- بررسی بیان ژن 37

3-4-1- RT-PCR. 37

3-4-2- تکثیر cDNA. 39

3-4-2-3- روش انجام آزمایش ساخت cDNA.. 44

3-4-2-4- نحوه انجام واكنش RT-PCR برای اطمینان از صحت سنتز cDNA.. 45

3-4-2-5- آشکار سازی محصولات PCR با الکتروفورز. 47

3-4-2-6- دستگاههای مورد نیاز برای الکتروفورز. 47

347

3-4-2-8- نحوه انجام الکتروفورز. 48

3-4-2-9- آشکار سازی ژل. 48

3Real time PCR. 49

Real-time PCR. 49

Real time PCR. 50

Real-time PCR. 51

3-5-3-1- روش غیر اختصاصی سنجش با Real-time PCR.. 51

. 52

Real time PCR. 55

3-5-6-2-روش انجام آزمایش Real time PCR. 55

3-5-6-3- آنالیز آماری 57

3-6-اندازه گیری α-Amylase در سرم موش: 57

3-6-2- اندازه گیری α-Amylase در سرم روش فتومتریک.. 57

فصل چهارم نتایج.. 60

4-2- تعیین کیفیت و غلظت RNA استخراج شده 66

4-3- بررسی کیفیت cDNA سنتز شده به وسیله PCR 67

4-4-1- مقایسه بیان ژن liver alpha amylase در موش های چاق و نرمال. 70

4-4-2-اثر چای سبز بر بیان ژن liver alpha amylase بر روی موش های چاق. 71

4-5- اندازه گیری آلفا آمیلازدر سرم به روش فتومتریک 72

فصل پنجم : بحث و نتیجه گیری 73

5-1- بحث و نتیجه گیری 74

5-2-پیشنهادات 8

منابع 83

خلاصه انگلیسی 92

عنوان فهرست جداول صفحه

cDNA 44

cDNA 45

Real time PCR. 55

Real time PCR. 56

عنوان فهرست نمودارها صفحه

نمودار 3-1-فازهای مختلف واکنش تکثیر 51

نمودار 3-2-Cycle threshold&Threshold. 53

نمودار 3-3-منحنی ذوب 54

نمودار 3-4-مراحل مختلف انجام واکنش Real time PCR. 56

نمودار 4-1-تغییرات وزن موش ها کنترل تیمار و کنترل عادی 64

نمودار 4-2-تغییرات وزن موش ها کنترل تیمار و کنترل عادی 64

نمودار 4-3-تغییرات وزن موش ها چاق تیمار و چاق عادی 65

نمودار 4-4-تغییرات وزن موش ها چاق تیمار و چاق عادی 65

نمودار 4-5-منحنی تکثیرژن آلفا آمیلاز کبدی 69

نمودار 4-6-منحنی ذوب ژن آلفا آمیلاز کبدی 69

نمودار 4-7-متوسط میزان تغییرات بیان ژن آلفا آمیلاز کبدی در موش های چاق عادی و کنترل عادی 70

نمودار 4-8-متوسط میزان تغییرات بیان ژن آلفا آمیلاز کبدی در موش های چاق عادی و چاق کنترل 71

نمودار 4-9-تغییرات آمیلاز در سرم موش های چاق و نرمال بر حسب IU/ml به روش فتومتریك 72

عنوان فهرست اشکال صفحه

شکل2-1-نمایی شماتیک از آلفا آمیلاز یون کلسیم به رنگ خاکی و یون کلرید به رنگ سبز است 11

شکل2-2-ساختار کریستالی آلفا آمیلاز جو ایزوآنزیم 1 16

شکل2-3-جایگاه ژن آمیلاز روی ژن 1p21 17

شکل2-4-این شکل تکامل ژن آمیلاز انسانی را نشان می دهد 19

شکل2-5-توالی ای که بعنوان عامل تفاوت در سایز بین mRAN آلفا آمیلاز کبدی و غدد بزاقی 20

شکل2-6-مقایسه شماتیکی از mRAN آلفا آمیلاز کبدی و بزاقی 21

شکل3-1-پلت آزمایشگاهی 30

شکل3-2-مراحل خونگیری از قلب موش 32

شکل3-3-مراحل جداسازی کبد موش 33

شکل3-4- غلظت مواد استفاده شده در Master mix استفاده شده در PCR 46

شکل3-5-اتصال SYBR به DNA 52

شکل4-1-تصویر باند حاصل از RNA استخراج شده 67

شکل4-2-صویر محصولات PCR چند نمونه که به صورت تصادفی انتخاب شده بودند 68

موضوعات: بدون موضوع لینک ثابت

فرم در حال بارگذاری ...

فید نظر برای این مطلب