1-3-2-4- عوامل حیوانی.. 26

 

فصل دوم : مرور منابع

 

2-1- بررسی منابع 29

 

فصل سوم : مواد و روش ها

 

3-1- مواد وروشها 43

 

3-1-1- نمونهبرداری.. 43

 

3-1-2- مشخصات گیاهشناسی گونههای مرتعی مطالعه شده. 43

 

3-1-2-1- گونه مرتعی خلر(Lathyrus sativa ). 43

 

3-1-2-2-  گونه مرتعی  قدومه(Alyssum inflatum). 44

 

3-1-2-3-  گونه مرتعی گونه آبدوست (Carex comans  (. 44

 

3-1-3- تجزیه شیمیایی نمونهها 44

 

3-1-4 – دام مورد استفاده و نحوه آمادهسازی دام. 46

 

3-1-5- جایگاه حیوانات و مکان انجام آزمایش… 47

 

3-1-6- روش کیسه نایلونی.. 48

 

3-1-6-1- عملیات انجام شده پس از خروج کیسهها از داخل شکمبه. 49

 

3-1-7- روش تولید گاز. 50

 

3-1-7-1- مواد و دستگاههای لازم برای انجام آزمون گاز. 51

 

3-1-7-2- حیوان دهنده مایع شکمبه و ابزار گرفتن و آمادهسازی مایع شکمبه. 51

 

3-1-7-3-آماده سازی دستگاه. 52

 

3-1-7-4-آماده سازی خوراک… 53

 

3-1-7-5-آمادهسازی محلولها 53

 

3-1-7-6- آزمون گاز. 54

 

3-1-7-7- محاسبه پارامترهای هضم‌پذیری.. 55

 

3-1-8- روش طیف‌سنجی مادون قرمزنزدیک انعکاسی(NIRS). 56

 

3-1-8-1- تعیین شاخص‌های کیفیت با طیف‌ سنجی مادون قرمزنزدیک… 56

 

3-1-8-2- جست و جوی اتوماتیک فیلترها 56

 

3-1-8-3- تعیین معادلة‌رگرسیونی از فیلترهای انتخاب شده. 57

 

3-1-8-4-  بررسی صحت معادلات‌کالیبراسیون(هم‌سنجی). 57

 

3-2- تجزیه و تحلیل آماری داده‌ها 57

 

فصل چهارم : نتایج

 

4- 1- نتایج 60

 

4- 1- 1- نتایج آنالیز شیمیایی  و طیف سنجی مادون قرمز (NIR) صفات کیفی در گونههای مطالعه شده. 60

 

4-2-  نتایج روش تولید گاز 64

 

4-2-1- پارامترهای تولید گاز و قابلیت هضم در گونهها 66

 

 

4-3- نتایج روش کیسه نایلونی 67

 

4-3-1- ناپدید شدن ماده خشک و پروتئین خام در دو گونه با روش (In-situ). 67

 

4-3 -2- ضرایب تجزیهپذیری ماده خشک و پروتئین گونههای مطالعه شده با روش In-situ. 70

 

4- 3- 3- تجزیهپذیری مؤثر ماده خشک و پروتئین گونههای مطالعه شده در سرعتهای عبور متفاوت با روش In-situ. 71

 

فصل پنجم : بحث

 

5- 1- نتایج تجزیه شیمیایی 87

 

5-2-آزمایشهای قابلیتهضم 91

 

5-3- نتیجه گیری کلی 96

 

5-4- پیشنهادات 96

 

منابع …………… 97
فهرست جداول

 

جدول 4- 1- مقایسه مقادیر ترکیب اجزا گونه های مطالعه شده در روش تجزیه شیمیایی و NIR (براساس ماده خشک)       61

 

جدول 4- 2- مقایسه  تیتست صفات دو روش تجزیه شیمیایی و NIR (براساس ماده خشک) در کل تیمارهای مطالعه شده   62

 

جدول 4- 3- مقادیر گاز تولید شده در زمانهای انکوباسیون گونههای مطالعه شده در روش تولید گاز 65

 

جدول 4-4 – مقایسه پارامترهای تولید گاز در گونههای مرتعی ……………………………………………………….. 67

 

جدول 4- 5-  تجزیهپذیری ماده خشک و پروتئین گونهها در زمانهای انکوباسیون روش کیسه نایلونی Insitu (درصد ماده خشک)   …………………………………………………………………………………………………………………………… 68

 

جدول 4- 6- مقایسه ضرایب تجزیه‎پذیری ماده خشک و پروتئین گونه‎ها در روش Insitu  (درصد ماده خشک)  71

 

جدول 4- 7- مقایسه تجزیهپذیری مؤثر ماده خشک و پروتئین گونهها در روش کیسه نایلونی  Insitu (درصد ماده خشک)  7

 

فهرست اشکال

 

شکل 3-1- مراحل فیستوله گذاری……………………………………………………………………………………….. 48

 

تصویر 4-1- نمودارمقادیر صفات اندازه‎گیری شده در روش شیمیایی در گونه‎های مطالعه شده…………….. 62

 

تصویر4-2– نمودار مقایسه میانگین کل تیمارها برای صفات مشترک در دو روش شیمیایی و

 

طیف‎سنجی……………………………………………………………………………………………………………………… 63

 

تصویر 4-3- نمودارهای همبستگی روش شیمیایی و طیف‎سنجی در کل تیمارها………………………………. 64

 

تصویر 4-4- نمودار روند تولید گاز در زمانهای انکوباسیون در گونه‎های مطالعه شده…………………………. 66

 

تصویر 4-5 – روند ناپدید شدن ماده خشک در روش کیسه نایلونی……………………………………………… 69

 

تصویر 4-6- روند تجزیه‎پذیری پروتئش کیسه نایلونی………………………………………………………………. 69

 

تصویر 4-7- نمودار همبستگی تجزیه ماده خشک و پروتئین میانگین تمام تیمارها در روش کیسه نایلونی

 

……………………………………………………………………………………………………………………………………. 70

 

تصویر 4-8- نمودار روند تجزیه‎پذیری موثر ماده خشک(a) و پروتئین(b) در سرعتهای عبور متفاوت در روش کیسه نایلونی 73

 

تصویر 4-9- نمودار میزان همبستگی بین تجزیه‎پذیری ماده خشک و پروتئین روش کیسه نایلونی با میزان گاز تولید با انکوباسیون یکسان…………………………………………………………………………………………………………………………… 74

 

 

 

 

 

2-3- پلاسمیدهای مورد استفاده……………………………………………………………….26

 

2-4- محیط کشت باکتری‏ها…………………………………………………………………….26

 

2-5- آنتی‏بیوتیک‏ها……………………………………………………………………………27

 

2-6- طراحی آغازگر………………………………………………………………………….27

 

2-7- شناسایی و جداسازی باکتری Xcc…………………………………………………………………………………….29

 

2-8- خالص سازی DNA ژنومی باکتری Xcc سویه‏ی ………………………..NIGEB.088(A*)31

 

2-9- تعیین کمیت و کیفیت DNA استخراج شده……………………………………………….31

 

2-10- واکنش زنجیره‏ای پلیمراز با آنزیم‏هایTaq  و Pfu دی.ان.آ پلیمراز جهت جداسازی ژن‏های هدف……………………………………………………………………………………………………………………………………..31

 

2-11- الکتروفورز محصولات واکنش زنجیره‏ای پلیمراز……………………………………………33

 

2-12- خالص‏سازی محصول واکنش زنجیره‏ای پلیمراز………………………………………….33

 

2-13- جداسازی محصول PCR و یا محصول حاصل از هضم آنزیمی از روی ژل آگارز……………34

 

2-14- هضم آنزیمی با آنزیم‏های محدود کننده تیپ …………………………………………..II35

 

2-15- الکتروفورز محصولات واکنش‏های هضم آنزیمی…………………………………………39

 

2-16- واکنش اتصال………………………………………………………………………….39

 

2-17- تکثیر پلاسمید………………………………………………………………………….42

 

2-18- اندازه‏گیری دانسیته نوری(OD) باکتری…………………………………………………..42

 

2-19- تکنیک Colony-PCR: غربالگری کلونی‏های نوترکیب……………………………………42

 

2-20- استخراج پلاسمید در مقیاس کم ……………………………………(Mini-Preparation)43

 

2-21- توالی‏یابی………………………………………………………………………………43

 

2-22- انتقال پلاسمید‏های نوترکیب pBI-hrpW و pBI-hrpG به سویه‏های آگروباکتریوم تومفاسینس با‏ استفاده از روش ذوب و انجماد…………………………………………………………………43

 

فصل سوم: نتیجه‏گیری و بحث

 

3- شناسایی باکتری Xcc (A*)……………………………………………………………………………………………………………………..47

 

3-1-  شناسایی به کمک تست بیماریزایی بر روی گیاه میزبان C.auratifolia…………………………………47

 

3-2-  شناسایی به کمک آغازگرهای اختصاصیMS+/MS-  و Xac01 / Xac02……………………………….48

 

3-3-  استخراج DNA ژنومی از باکتری XCC……………………………………………………………………………49

 

3-4-  تعیین کیفیت و کمیت DNA استخراج شده………………………………………………50

 

3-5- تکثیر ژن‏هایhrpW  و hrpG با واکنش زنجیره‏ای پلیمراز………………………………….51

 

3-5-1-  طراحی آغازگرهای مناسب……………………………………………………………51

 

3-5-2-  بهینه‏سازی شرایط واکنش زنجیره‏ای پلیمراز……………………………………………51

 

3-5-3-  الکتروفورز محصول واکنش زنجیره‏ای پلیمراز………………………………………….53

 

3-6-  تایید ناقل‏های کلونینگ و بیانی از طریق الگوهای برشی حاصل از هضم توسط آنزیم‏های برشی نوع II…………………………………………………………………………………………………………………………………….54

 

3-7-  همسانه‏سازی ژن‏هایhrpG  و hrpW در ناقل‏های کلونینگ (PGEM7zf(-) , pUC19)………….55

 

3-8-  تایید همسانه‏سازی ژن‏های هدف در ناقل‏های کلونینگ (pGEM7zf(-))،( pUC19)………………57

 

3-8-1-  واکنش کلونی PCR کلون‏های گزینش شده……………………………………………57

 

3-8-2-  تایید همسانه‏سازی ژن‏هایhrpW/G  در ناقل‏های کلونینگ با روش هضم آنزیمی…………58

 

3-8-3-  تایید همسانه‏سازی ژن‏های hrpW/G در ناقل‏های کلونینگ با روش واکنش زنجیره‏ای پلیمراز……………………………………………………………………………………………………………………………………59

 

3-9- همسانه سازی ژن‏های hrpG/W در ناقل بیانی pBI121………………………………………………………59

 

3-10- تایید همسانه سازی ژن‏های hrpG/W در ناقل بیانی pBI121…………………………………………….62

 

3-10-1- واکنش کلونی PCR کلون‏های تشکیل شده……………………………………………62

 

3-10-2- تایید همسانه‏سازی ژن‏های hrpG/W در ناقل بیانی pBI121 با روش واکنش هضم آنزیمی.63

 

 

3-10-3- تایید همسانه‏سازی ژن‏های hrpW/G در ناقل بیانی pBI121 با روش واکنش زنجیره‏ای پلیمراز……………………………………………………………………………………….64

 

3-11- توالی‏یابی……………………………………………………………………………..65

 

3-11-1- نتایج توالی‏یابی……………………………………………………………………..66

 

3-12- انتقال پلاسمیدهای نوترکیب pBI.hrpG و pBI.hrpW به سویه‏های آگروباکتریوم تومفاسینس.67

 

3-13- تایید انتقال پلاسمیدهای نوترکیب pBI.hrpW/G به سویه‏های آگروباکتریوم تومفاسینس……..67

 

3-13-1- تایید انتقال پلاسمیدهای نوترکیب pBI.hrpW/G با روش کلونی PCR…………………………..67

 

فصل چهارم: جمع‏بندی کلی و پیشنهادها

 

4- جمع‏بندی کلی نتایج……………………………………………………………………….70

 

4-1- پیشنهادها………………………………………………………………………………71

 

پیوست

 

5- دستورالعمل استخراج و خالص‏سازی DNA ژنومی باکتری xanthomonas citri pv. citri سویه 088(A*) NIGEB-……………………………………………………………………………………………………………………………………84

 

5-1-  محلول‏های لازم جهت استخراج DNA ژنومی……………………………………………84

 

5-1-1- مراحل استخراج DNA ژنومی…………………………………………………………85

 

5-1-2- روش اسپکتروفوتومتری………………………………………………………………86

 

5-1-3- الکتروفورز بر روی ژل آگارز………………………………………………………….87

 

6- الکتروفورز با ژل آگارز……………………………………………………………………………………. 88

 

6-1- نمای ساده از دستگاه الكتروفورز…………………………………………………………88

 

6-2- ژل آگارز……………………………………………………………………………….89

 

6-3- اتیدیوم بروماید………………………………………………………………………….89

 

6-4- بافر بارگزاری ژل آگارز………………………………………………………………….90

 

6-5- طرز تهیه محلول …………………………………………………………….TBE 0.5X91

 

6-6- طرز تهیه آگارز 1%……………………………………………………………………………………………..91

 

7- دستورالعمل خالص‏سازی فرآورده‏های تکثیر شده و قطعات DNA از روی ژل آگارز…………………92

 

7-1- خالص‏سازی فرآورده‏های تکثیر شده با کیت ……………………………………..Bioneer92

 

7-2- خالص‏سازی قطعات DNA از ژل آگارز……………………………………………………………………………93

 

8- دستورالعمل تهیه باكتری‏های مستعد برای پذیرش DNA خارجی…………………………………….95

 

8-1- تهیه سلول‏های مستعد E.coli……………………………………………………………………………95

 

8-2- دستورالعمل تراریزش باکتری مستعد به روش شوک حرارتی………………………………………………96

 

8-3- تهیه‏ی سلول‏های مستعد و انتقال پلاسمید‏های نوترکیب pBI-hrpW و  pBI-hrpG به سویه‏های آگروباکتریوم تومفاسینس با استفاده از روش ذوب و انجماد……………………………………………………….97

 

9- استخراج پلاسمید در مقیاس کم از باکتری E.coli سویه DH5α……………………………………………..99

 

9-1- استخراج پلاسمید به روش دستی…………………………………………………………99

 

9-2- استخراج پلاسمید با استفاده از کیت MBST (دکتر شایان)…………………………………….101

 

9-3- روش تهیه محلول های IPTG و …………………………………………………X-Gal103

 

9-3-1- تهیه محلول ایزوپروپیل D-B تیوگالاکتوپیرانوزید (IPTG)…………………………………………….103

 

9-3-2- تهیه 5 برمو-3 کلرو- اتیدولیل D-B گالاکتوزید (X-Gal)………………………………103

 

10- تهیه مایه تلقیح و بهینه‏سازی شرایط مایه‏زنی گیاه میزبان……………………………………………………..103

 

 

 

فهرست جداول

 

1-1- بیماریزایی فرم‏های مختلف شانکر روی چهار گونه از مرکبات………………………………….       12

 

1-2- مشخصات آغازگرهای اختصاصی برای تکثیر و شناسایی………………………………………….     29

 

2-2- برنامه Multipelex PCR با آغازگر‏های MS+/MS-  و Xac01/Xac02………………………          30

 

3-2- ترکیب محلول مادری برای واکنش Multipelex PCR جهت شناسایی باکتری…………….         30

 

4-2- شیب‏ دمایی به‏کار رفته برای تعیین بهترین دمای اتصال با آنزیم Taq………………………….       32

 

5-2- ترکیب محلول مادری برای واکنش زنجیره‏ای پلیمراز با آنزیم pfu دی.ان.آ پلیمراز……….         32

 

6-2- چرخه حرارتی به‏کار ‏رفته برای تکثیر نهایی با آنزیم pfu………………………………………….      33

 

7-2- شرایط واکنش هضم ژن hrpW و ناقل همسانه‏سازی مربوطه (pGEM7zf(-))…………….          36

 

8-2- شرایط واکنش هضم ژن hrpG و ناقل همسانه‏سازی مربوطه (pUC19)……………………..        36

 

9-2- شرایط واکنش دوتایی هضم آنزیمی جهت تایید ناقل‏های همسانه‏سازی ((-)pGEM7zf) و (pUC19)……………………………………………………………………………………………………………..     37

 

10-2– شرایط واکنش هضم دوتایی آنزیمی جهت تایید ناقل بیانی(pBI121)……………………..        37

 

11-2- شرایط واکنش هضم آنزیمی ژن hrpW و pBI121 جهت بازیابی قطعات مورد نظر از روی ژل……………………………………………………………………………………………………………………….    38

 

12-2– شرایط واکنش هضم ژن hrpG و ناقل بیانی جهت بازیابی قطعات مورد نظر از روی ژل…………………………………………………………………………………………………………………………. 38

 

13-2- شرایط واکنش اتصال (pBI121-hrpG)…………………………………………………………..         40

 

14-2- شرایط واکنش اتصال (pBI121-hrpW)……………………………………………………………       40

 

15-2- شرایط واکنش اتصال (pUC19-hrpG)…………………………………………………………….        41

 

16-2- شرایط واکنش اتصال (pGEM7zf(-)-hrpW)……………………………………………………         41

 

17-2- چرخه حرارتی به‏کار رفته برای واکنش کلونی PCR به منظور تایید همسانه‏سازی در وکتور بیانی……………………………………………………………………………………………………………………..   45

 

18-2- ترکیبات محلول مادری واکنش زنجیره‏ای کلونی PCR جهت تایید عمل همسانه‏سازی دروکتورهای کلونینگ و بیانی……………………………………………………………………………………     45

 

1-5- مواد و مقدار مورد نیاز جهت تهیه بافر Loading dye………………………………………………     9

 

فهرست شکل‏ها

 

1-3- تست بیماریزایی روی لیمو………………………………………………………………………………………………48

 

2-3- تست (Xaco1 / Xaco2 / MS+/MS) Multiplex PCR……………………………………………………..49

 

3-3- اکتروفورزDNA ژنومی استخراج شده بر روی ژل آگارز 1%………………………………………………..50

 

4-3- واکنش زنجیره‏ای پلیمراز با Taq دی.ان.آ پلیمراز و گرادیان دمایی جهت بهینه‏سازی بهترین دمای اتصال با پرایمرهای اختصاصی………………………………………………………………………………………………….53

 

5-3- واکنش زنجیره‏ای پلیمراز برای تکثیر ژن‏های hrpG , hrpW با آغازگرهای اختصاصی و آنزیم pfu دی.ان.آ پلیمراز………………………………………………………………………………………………………………………..53

 

6-3- الکتروفورز محصول هضم آنزیمی ناقل‏های کلونینگ و بیانی با آنزیم‏های برشی نوع II بر روی ژل آگارز 1%………………………………………………………………………………………………………………………………..54

 

7-3- هضم آنزیمی فراورده ژن‏هایhrpG  و hrpW جهت بازیابی از روی ژل آگارز)الف) و قطعات بازیابی شده(ب)………………………………………………………………………………………………………………………55

 

8-3- هضم آنزیمی ناقل‏های کلونینگpUC19  و pGM7zf(-) جهت بازیابی از ژل آگارز(الف) قطعات بازیابی شده(ب)……………………………………………………………………………………………………………………..55

 

 

1-10- روش های تثبیت آنزیم…………………………………………………………………………………………………………………….13

 

1-10-1- تثبیت با جذب غیر کوالانسی………………………………………………………………………………………………………13

 

1-10-2- تثبیت از طریق فعل و انفعالات یونی…………………………………………………………………………………………..13

 

1-10-3- تثبیت با اتصالات کوالانسی………………………………………………………………………………………………………….14

 

1-10-4- تثبیت بوسیله اتصال عرضی آنزیم ها …………………………………………………………………………………………15

 

1-10-5- تثبیت بوسیله به دام انداختن در یک ژل پلیمری یا کپسول …………………………………………………….15

 

1-11- کپسوله کردن آنزیم و روش محصور کردن …………………………………………………………………………………… 16

 

1-11-1- مزیت های تثبیت آنزیم در میکروکپسول ها ……………………………………………………………………………..16

 

1-11-2- تکنولوژی انکپسوله کردن برای کاربردهای غذایی …………………………………………………………………….17

 

1-12- اتلاف فعالیت آنزیم های تثبیت شده و ویژگی های آن ها …………………………………………………………… 18

 

1-13- تکنولوژی نوین آنزیم برای کاربردهای غذایی ………………………………………………………………………………….19

 

1-14- هیدرولیز لاکتوز و مزایای هیدرولیز لاکتوز شیر ………………………………………………………………………….. 20

 

1-15- هیدرولیز لاکتوز آب پنیر ………………………………………………………………………………………………………………..21

 

1-16- کاربردهای بالقوه آب پنیر هیدرولیز شده  …………………………………………………………………………………….21

 

1-18- کاربردهای تثبیت آنزیم لاکتازدر صنعت فرآوری موادغذایی …………………………………………………………21

 

1-19- ویژگی های آنزیم لاکتاز حاصل از منابع مختلف …………………………………………………………………………..23

 

1-20- فاکتورهای موثر در هزینه فرآیند تثبیت ………………………………………………………………………………………..25

 

 

 

2- مواد و روش ها ………………………………………………………………………………………………………………………………………26

 

 

 

2-1- طرح آزمایش و تجزیه و تحلیل آماری  …………………………………………………………………………………………….27

 

2-2- مواد شیمیایی و تجهیزات مورد استفاده در آزمایش ها ……………………………………………………………………29

 

2-3- طراحی بیوراکتور و مشخصات ستون بیوراکتور  …………………………………………………………………………….. 31

 

2-4-دیاگرام خط تولید شیر کم لاکتوز برای آزمایش ها ……………………………………………………………………………33

 

2-5-روش تولید و ساخت شیر کم لاکتوز (غیر مداوم و مداوم ) ……………………………………………………………….34

 

2-6- روش اندازه گیری درصد هیدرولیز لاکتوز ………………………………………………………………………………………….35

 

2-7- نحوه تثبیت آنزیم در سدیم آلژینات و رخداد های تثبیت آنزیم در آلژینات …………………………………….35

 

 

 

3- نتیجه گیری ……………………………………………………………………………………………………………………………………………..38

 

 

 

3-1- درصد هیدرولیز لاکتوز شیر…………………………………………………………………………………………………………………39

 

3-1-1- آنالیز واریانس مدل  ……………………………………………………………………………………………………………………….40

 

3-2- اثر دما روی آنزیم لاکتاز ……………………………………………………………………………………………………………………..42

 

3-2-1- اثر غلظت آنزیم تثبیت شده …………………………………………………………………………………………………………..44

 

 

3-3- اثر غلظت آلژینات روی کارایی بیوراکتور ………………………………………………………………………………………….45

 

3-3-1- اثر فلوریت روی کارایی ستون ………………………………………………………………………………………………………46

 

 

 

4- بهینه سازی و نتیجه گیری کلی ……………………………………………………………………………………………………………47

 

4-1- نتیجه گیری کلی ……………………………………………………………………………………………………………………………….48

 

4-2- پیشنهادات ………………………………………………………………………………………………………………………………………….49

 

چکیده انگلیسی …………………………………………………………………………………………………………………………………………….50

 

پیوست …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..52

 

منابع

 

 

 

فهرست جداول 

 

جدول 1-1-منابع مختلف آنزیم لاکتاز و عامل های تثبیت کننده  …………………………………………………………..24

 

جدول 1-2- هیدرولیز لاکتوز با تکنیک های مختلف تثبیت ……………………………………………………………………..25

 

جدول 2- 4 –طراحی آزمایشات ………………………………………………………………………………………………………………… 28

 

جدول 2-5 – آنالیز واریانس مدل ………………………………………………………………………………………………………………..40

 

جدول 4-1-مقادیر بهینه جهت تولید شیر کم لاکتوز با هدف حداکثر هیدرولیز لاکتوز و کمینه بودن دبی جریان شیر ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………47

 

جدول 4-2-مقادیر بهینه جهت تولید شیر کم لاکتوز با هدف حداکثر هیدرولیز لاکتوز و بیشینه بودن دبی جریان شیر……………………………………………………………………………………………………………………………………………………..47

 

فهرست اشکال

 

شکل 1-1-تصویر سه بعدی آنزیم لاکتاز حاصل از E.Coli …………………………………………………………………………..4

 

شکل 1-2- لاکتوز اندازه گیری شده به روش نقطه انجماد وکروماتوگرافی مایع ………………………………………….9

 

شکل 1-3-آنزیم بنزآلدئید لیاز به همراه زنجیره اش از طریق حامل اصلاح شده با نیکل تثبیت شده و تشکیل بنزوئین را کاتالیز می کند  ………………………………………………………………………………………………………………..14

 

شکل 1-4-متراکم شدن و اتصال عرضی آنزیم ها برای ایجاد یک CLA (توده های آنزیمی اتصال عرضی شده ) …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………15

 

شکل 2-1- طراحی Packed Bed Bioreactor ……………………………………………………………………………………31

 

شکل 2-2 -دیاگرام خط تولید شیر کم لاکتوز ……………………………………………………………………………………………33

 

شکل 2-3- نحوه تثبیت آنزیم به روش محصور کردن …………………………………………………………………………………36

 

شکل3-1- کانتورپلات نشان دهنده اثر دما و غلضت آنزیم بر درصد هیدرولیز لاکتوز موجود در شیر ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..43

 

شکل 3- 2 – نمودار سطحی نشان دهنده اثر فلوریت و غلظت آلژینات بر درصد هیدرولیز لاکتوز موجود در شیر  ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….46

 

 

1-5-1-4- مواد تلخ: 14

 

1-5-1-5- فلاون‌ها و فلاونوئیدها: 14

 

1-5-1-6-موسیلاژ: 15

 

1-5-1-7- ساپونین‌ها: 15

 

1-5-1-8- اسید سیلیسیک: 16

 

1-5-1-9- تانن‌ها: 16

 

1-5-2- عملکرد و نقش متابولیت‌های ثانویه: 17

 

1-6- معرفی برخی از باکتری‌های بیماری‌زای انسانی: 18

 

1-6-1-  Escherichia coli : 18

 

1-6-2- Staphylococcus aureus : 19

 

1-6-3- Staphylococcus epidermidis : 19

 

1-6-4- Bacillus cereus : 19

 

1-6-5-  Candida albicans : 20

 

 

 

فصل دوم: مروری بر پژوهش‌ها

 

2-1-  مروری بر پژوهش‌های انجام شده روی مواد موثره گونه‌های مختلف مرزه: 21

 

2-2-  مروری بر پژوهش‌های انجام شده روی خاصیت ضدمیکروبی گونه‎های مختلف مرزه: 22

 

 

 

فصل سوم: مواد و روش‌ها

 

1-3- مواد گیاهی:……………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 27

 

3-2- استخراج اسانس گیاه مرزه خوزستانی و مرزه رشینگری: 27

 

3-3- آنالیز ترکیبات اسانس گیاه مرزه خوزستانی و مرزه رشینگری با استفاده از دستگاهGC/MS: 27

 

3-4- خالص سازی میکروب‌هاو نگهداری آن‌ها: 29

 

3-5- اسامی میکروارگانیزم‌های مورد آزمایش: 29

 

3-6- تعیین قطر هاله عدم رشد برای مقادیر حداقل غلظت بازدارندگی و حداقل غلظت کشندگی میکروارگانیزم‌ها : 30

 

3-7- تعیین حداقل غلظت بازدارندگی و حداقل غلظت کشندگی میکروارگانیزم‌ها به روش میکروبراث دایلویشن: 32

 

3-8- تجزیه و تحلیل آماری: 32

 

 

 

فصل چهارم: آنالیز و نتایج

 

4-1- ترکیبات تشکیل دهنده اسانس گیاه مرزه خوزستانی: 34

 

4-2- ترکیبات تشکیل دهنده اسانس گیاه مرزه رشینگری: 37

 

4-3-  فعالیت ضدمیکروبی اسانس گیاه مرزه خوزستانی: 40

 

4-4-  مقایسه میکروارگانیزم‌هابر مبنای قطرهاله عدم رشد تحت تاثیر اسانس گیاه مرزه خوزستانی: 40

 

4-5- تجزیه واریانس‌آخرین غلظت اسانس گیاه مرزه خوزستانی در روش میکروبراث دایلویشن: 43

 

. 4-6- حداقل غلظت بازدارندگی(MIC ) و حداقل غلظت کشندگی باکتری(MBC ) اسانس گیاه مرزه خوزستانی در روش میکروبراث‌دایلویشن: 43

 

4-7- فعالیت ضدمیکروبی اسانس گیاه مرزه رشینگری: 44

 

4-8- مقایسه میکروارگانیزم‌هابر مبنای قطرهاله عدم رشد تحت تاثیر اسانس گیاه مرزه رشینگری: 45

 

4-9- تجزیه واریانس ‌آخرین غلظت اسانس گیاه مرزه رشینگری در روش میکروبراث‌دایلویشن: 48

 

4-10- حداقل غلظت بازدارندگی(MIC ) و حداقل غلظت کشندگی باکتری(MBC ) اسانس گیاه مرزه رشینگری در روش میکروبراث‌دایلویشن: 48

 

 

 

 

فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری

 

5-1- ترکیبات تشکیل دهنده اسانس گیاه مرزه خوزستانی و مرزه رشینگری: 50

 

5-2- خاصیت ضدمیکروبی اسانس گیاه مرزه خوزستانی و مرزه رشینگری: 55

 

 

 

نتیجه‌گیری:                                                                                                                         60

 

پیشنهادات:                                                                                                                                       60

 

منابع:                                                                                                                                                               88

 

فهرست شکل‌ها

 

 

 

فصل سوم:

 

3-1- گیاه دارویی مرزه خوزستانی: 28

 

3-2- گیاه دارویی مرزه رشینگری: 28

 

3-3- دستگاه کروماتوگرافی گازی متصل به طیف سنج جرمی مورد استفاده در آزمایش: 31

 

3-4- دستگاه اسپکتروفتومتر مورد استفاده در آزمایش: 31

 

3-5- نمونه ای از قطر هاله عدم رشد برای مقدار MIC اسانس گیاه مرزه خوزستانی روی باکتری Escherichia coli مورد پژوهش: 33

 

3-6- حداقل غلظت بازدارندگی رشد اسانس گیاه مرزه خوزستانی و مرزه رشینگری روی باکتری Staphylococcus aureus: 33

 

 

 

فصل چهارم:

 

 

 

4-1-  کروماتوگرام ترکیبات تشکیل دهنده اسانس گیاه مرزه خوزستانی مورد آزمایش: 34

 

4-2- کروماتوگرام ترکیبات تشکیل دهنده اسانس گیاه مرزه رشینگری مورد آزمایش: 37

 

 

 

فصل پنجم:

 

5-1- دیواره‌ی سلولی باکتری‌های گرم مثبت و گرم منفی: 57

 

 

 

فهرست نمودار‌ها

 

فصل چهارم:

 

4-1-                                                                                                                                                                                                         مقایسه میکروارگانیزم ها بر مبنای قطرهاله عدم رشد تحت تاثیر اسانس گیاه مرزه خوزستانی: 41

 

4-2-                                                                                                                                                                                                          مقایسه میکروارگانیزم ها بر مبنای قطرهاله عدم رشد تحت تاثیر اسانس گیاه مرزه رشینگری: 46

 

فهرست جدول‌ها

 

فصل سوم:

 

 

2-2-2- شکل گیری بانک… 10

 

2-2-3- تاریخچه بانکداری.. 12

 

2-2-3-1- بانکداری در دوره قدیم. 12

 

2-2-3-1-1- بابل. 12

 

2-2-3-1-2- یونان. 12

 

2-2-3-1-3- ایران. 12

 

2-2-3-1-4- رم. 12

 

2-2-3-1-5- چین.. 13

 

2-2-3-2- بانکداری در قرون وسطا (از قرن پنجم تا پانزدهم میلادی) 13

 

2-2-3-3- بانکداری در دوره جدید (از قرن پانزدهم به بعد) 13

 

2-2-3-4- بانکداری در ایران. 14

 

2-2-3-4-1- صرافی.. 14

 

2-2-3-4-2- بانکداری.. 14

 

2-2-3-4-2-1- بانکداری قبل از انقلاب اسلامی.. 14

 

2-2-3-4-2-2- نظام بانکی بعد از انقلاب اسلامی ایران. 17

 

2-2-3-4-2-3- بانکداری اسلامی در ایران. 17

 

2-2-3-4-3- قوانین بانکداری.. 18

 

2-2-3-4-4- اهداف و وظایف بانک… 18

 

2-2-3-5- بانک­های فعال موجود در ایران. 20

 

2-2-3-5-1- بانک­های دولتی.. 20

 

2-2-3-5-1-1- بانک ملی ایران: 20

 

2-2-3-5-1-2- بانک صادرات ایران: 21

 

2-2-3-5-1-3- بانک تجارت.. 21

 

2-2-3-5-1-4- بانک سپه. 21

 

2-2-3-5-1-5- بانک کشاورزی.. 21

 

2-2-3-5-1-6- بانک رفاه کارگران. 21

 

2-2-3-5-1-7- بانک ملت.. 22

 

2-2-3-5-1-8- بانک مسکن.. 22

 

2-2-3-5-1-9- بانک توسعه صادرات ایران. 22

 

2-2-3-5-1-10- بانک صنعت و معدن. 22

 

2-2-3-5-1-11- پست بانک… 23

 

2-2-3-5-1-12- بانک توسعه تعاون. 23

 

2-2-3-5-1-13- بانک قرض­الحسنه مهر ایران. 23

 

2-2-3-5-2- بانک­های خصوصی.. 23

 

2-2-3-5-2-1- بانک اقتصاد نوین.. 23

 

2-2-3-5-2-2- بانک پارسیان. 23

 

2-2-3-5-2-3- بانک پاسارگاد. 24

 

2-2-3-5-2-4- بانک کارآفرین.. 24

 

2-2-3-5-2-5- بانک سامان. 24

 

2-2-3-5-2-6- بانک سرمایه. 24

 

 

2-2-3-5-2-7- بانک سینا 24

 

2-2-3-5-2-8- بانک تات.. 24

 

2-2-3-5-2-9- بانک شهر. 25

 

2-2-3-5-2-10- بانک دی.. 25

 

2-2-3-5-2-11- بانک انصار. 25

 

2-2-3-5-2-12- بانک حکمت ایرانیان. 25

 

2-2-3-5-2-13- بانک گردشگری.. 25

 

2-2-3-5-2-14- بانک ایران زمین.. 26

 

2-2-3-5-2-15- بانک قوامین.. 26

 

2-2-3-5-2-16- بانک خاورمیانه. 26

 

2-2-3-5-2-17- بانک آینده 26

 

2-2-4- تاریخچه بانک کشاورزی.. 27

 

2-2-5- بانکداری الکترونیک… 28

 

2-2-5-1- تاریخچه بانكداری الكترونیكی.. 29

 

2-2-5-1-1- پیدایش بانکداری الکنرونیکی.. 29

 

2-2-5-1-2- بانكداری الكترونیكی در ایران. 30

 

2-2-5-2- انواع بانکداری الکترونیک… 31

 

2-2-5-2-1- بانکداری خانگی.. 31

 

2-2-5-2-2- بانکداری از راه دور. 31

 

2-2-5-2-3- بانکداری اینترنتی.. 31

 

2-2-5-1-4- تلفن­بانک… 31

 

2-2-5-2-5- بانکداری از طریق تلویزیون کابلی.. 32

 

2-2-5-2-6- دستگاه خودپرداز. 32

 

2-2-5-2-7- دستگاه فروش نقطه­ای.. 32

 

2-2-5-3- سطوح بانکداری الکترونیک… 32

 

2-2-5-3-1- بانکداری الکترونیکی مصرف­کننده (در سطح مشتری): 32

 

2-2-5-3-2- بانکداری الکترونیکی بین بانکی: 33

 

2-2-5-4- مقایسه بانکداری الکترونیکی با بانکداری سنتی.. 33

 

2-2-5-5- مزایای بانکداری الکترونیکی.. 34

 

2-2-5-6- عوامل پذیرش بانکداری الکترونیک… 35

 

بخش دوم……………………………………………………………………………………………………….36

 

2-3- وفاداری مشتری.. 36

 

2-3-1- رویکرد رفتاری.. 37

 

2-3-2- رویکرد نگرشی.. 38

 

2-3-2-1- وفاداری.. 40

 

2-3-2-2- وفاداری پنهان. 40

 

2-3-2-3- وفاداری کاذب.. 40

 

2-3-2-4- عدم­وفاداری.. 41

 

2-3-3- رضایت مشتری و وفاداری مشتری.. 41

 

2-3-4- کیفیت خدمات.. 43

 

بخش سوم……………………………………………………………………………………………………….44

 

2-4- پیشینه تحقیق………………………… 44

 

بخش چهارم………………………… 49

 

2-5- جدول مرور سوابق تحقیق (چارچوب نظری تحقیق) 49

 

فصل سوم 57

 

متدولوژی تحقیق. 58

 

3-1- موقعیت جغرافیایی منطقه مورد مطالعه. 58

 

3-1-1- معرفی استان گیلان. 58

 

شکل 3-1- نقشه استان گیلان. 58

 

3-1-2- شهرستان­های استان گیلان. 59

 

3-2- روش تحقیق………………………… 60

 

3-3- جامعه و نمونه آماری.. 60

 

جدول 3-1- شعب روستایی بانک کشاورزی استان گیلان و تعداد پرسشنامه توزیع شده در آنها 60

 

3-4- ابزار گردآوری داده 61

 

جدول  3-2- ارزشهای عددی گویه­های پرسشنامه 62

 

3-5- روایی و پایایی ابزار اندازه­گیری.. 62

 

3-5-1- روایی (اعتبار) 62

 

3-5-2- پایایی.. 62

 

جدول 3-3- میزان اعتماد (پایایی) پرسشنامه با استفاده از روش آلفای كرونباخ. 63

 

3-7- متغیرهای تحقیق و تعاریف عملیاتی.. 63

 

3-7-1- متغیرهای مستقل. 63

 

3-7-1-1- عوامل فردی و محیطی.. 63

 

3-7-1-2- کارآیی خدمات بانکداری الکترونیک… 63

 

3-7-1-3- کامل بودن خدمات بانکداری الکترونیک… 64

 

3-7-1-4- در دسترس بودن خدمات بانکداری الکترونیک… 64

 

3-7-1-5- اعتماد به خدمات بانکداری الکترونیک… 64

 

3-7-1-6- پاسخگو بودن خدمات بانکداری الکترونیک… 64

 

3-7-1-7- رضایت از خدمات بانکداری الکترونیک… 64

 

3-7-2- متغیر وابسته. 65

 

3-8- فرضیه­های تحقیق. 65

 

جدول 3-4- فرضیه­های تحقیق. 66

 

3-9- روش تجزیه و تحلیل داده­ها 67

 

3-9-1- آمار توصیفی.. 67

 

3-9-2- آمار استنباطی.. 68

 

فصل چهارم 69

 

تجزیه و تحلیل اطلاعات.. 69

 

4-1- مقدمه………………………… 70

 

4-2- یافته­های توصیفی.. 70

 

4-2-1- گروه­های سنی.. 71

 

4-2-2- جنسیت.. 72

 

4-2-3- سطح تحصیلات.. 72

 

4-2-4- شغل. 73

 

4-2-5- سابقه استفاده از خدمات الکترونیک… 74

 

4-2-6- روش استفاده از خدمات بانکداری الکترونیک بانک کشاورزی.. 75

 

4-2-7- بیشترین روش استفاده از خدمات الکترونیک بانک کشاورزی.. 76

 

4-2-8- دفعات استفاده از خدمات بانکداری الکترونیک… 77

 

4-2-9- دفعات مراجعه به شعب بانک کشاورزی.. 78

 

4-2-10- استفاده از تسهیلات بانکی.. 79

 

4-2-11- کارآیی خدمات بانکداری الکترونیک بانک کشاورزی.. 80

 

4-2-12- کامل بودن خدمات بانکداری الکترونیک بانک کشاورزی.. 81

 

4-2-13- در دسترس بودن خدمات بانکداری الکترونیک بانک کشاورزی.. 82

 

4-2-14- اعتماد به خدمات بانکداری الکترونیک بانک کشاورزی.. 83

 

4-2-15- پاسخگویی بانکداری الکترونیک بانک کشاورزی.. 84

 

4-2-16- رضایت از خدمات بانکداری الکترونیک بانک کشاورزی.. 85

 

4-2-17- وفاداری به بانکداری الکترونیک بانک کشاورزی.. 86

 

4-3- یافته­های استنباطی.. 88

 

4-4- مقایسه گروه­های مورد مطالعه از نظر وفاداری. 94

 

4-4-1- مقایسه دو گروه زنان و مردان از نظر میزان وفاداری. 94

 

4-4-2- مقایسه گروه­های تحصیلی از نظر میزان وفاداری. 95

 

4-4-3- مقایسه افراد با شغل­های مختلف از نظر میزان وفاداری­. 96

 

فصل پنجم. 97

 

خلاصه، نتیجه­گیری، بحث و پیشنهادها 97

 

5-1- خلاصه………………………… 98

 

5-1-1- مقدمه. 98

 

5-1-2- سوال­های تحقیق. 98

 

5-1-3- اهداف تحقیق. 99

 

5-1-3-1- هدف کلی.. 99

 

5-1-3-2- اهداف اختصاصی.. 99

 

5-1-4- محدوده تحقیق. 99

 

5-1-4-1- محدوده مکانی.. 99

 

5-1-4-2- محدوده زمانی.. 100

 

5-1-5- محدودیت­های تحقیق. 100

 

5-1-6- روش و نوع تحقیق. 100

 

5-1-7- جامعه آماری.. 100

 

5-1-8- روش نمونه­گیری.. 100

 

5-1-9- متغیرهای تحقیق. 101

 

5-1-9-1- متغیرهای مستقل. 101

 

5-1-9-2- متغیر وابسته. 101

 

5-1-10- فرضیه­های تحقیق. 101

 

5-1-11- روش­های تجزیه و تحلیل اطلاعات.. 101

 

5-1-11-1- آمار توصیفی.. 102

 

5-1-11-2- آمار استنباطی.. 102

 

5-2- نتیجه گیری………………………… 103

 

5-2-1- یافته­های توصیفی.. 103

 

– گروه­های سنی.. 103

 

– کارآیی خدمات بانکداری الکترونیک بانک کشاورزی.. 104

 

– کامل بودن خدمات بانکداری الکترونیک بانک کشاورزی.. 104

 

– در دسترس بودن خدمات بانکداری الکترونیک بانک کشاورزی.. 104

 

– اعتماد به خدمات بانکداری الکترونیک بانک کشاورزی.. 104

 

– پاسخگویی بانکداری الکترونیک بانک کشاورزی.. 105

 

– رضایت از خدمات بانکداری الکترونیک بانک کشاورزی.. 105

 

– وفاداری به بانکداری الکترونیک بانک کشاورزی.. 105

 

5-2-2- یافته­های استنباطی.. 105

 

5-3- بحث………………………… 106

 

5-4- پیشنهادها………………………… 107

 

5-4-1- پیشنهادهای پژوهش حاضر. 107

 

5-4-2- پیشنهاد پژوهش­های آینده 108

 

منابع. 109

 

پیوست­ها 114

 

 

 

فهرست جداول

 

جدول 2-1: مقایسه تطبیقی بین ویژگی­های بانکداری الکترونیکی و سنتی. 34

 

2-5- جدول مرور سوابق تحقیق (چارچوب نظری تحقیق)  49

 

جدول 3-1- شعب روستایی بانک کشاورزی استان گیلان و تعداد پرسشنامه توزیع شده در آنها 60

 

جدول  3-2- ارزش­های عددی گویه­های پرسشنامه 62

 

جدول 3-3- میزان اعتماد (پایایی) پرسشنامه با استفاده از روش آلفای كرونباخ. 63

 

جدول 3-4- فرضیه­های تحقیق. 66

 

جدول 4-1- توزیع فراوانی افراد مورد مطالعه برحسب گروه­های سنی. 71

 

جدول 4-2- توزیع فراوانی افراد مورد مطالعه برحسب جنس… 72

 

جدول 4-3- توزیع فراوانی افراد مورد مطالعه برحسب سطح تحصیلات.. 72

 

جدول 4-4- توزیع فراوانی افراد مورد مطالعه برحسب شغل. 73

 

جدول 4-5- توزیع فراوانی افراد برحسب سابقه استفاده از خدمات الکترونیک.. 74

 

جدول 4-6- توزیع فراوانی کشاورزان مورد مطالعه برحسب استفاده از خدمات بانکداری الکترونیک بانک کشاورزی  75

 

جدول 4-7- توزیع فراوانی افراد مورد مطالعه برحسب روش­های استفاده از خدمات الکترونیک بانک کشاورزی 76

 

جدول 4-8- توزیع فراوانی افراد مورد مطالعه برحسب دفعات استفاده از خدمات بانکداری الکترونیک.. 77

 

جدول 4-9- توزیع فراوانی افراد مورد مطالعه برحسب مراجعه به شعب بانک.. 78

 

جدول 4-10- توزیع فراوانی افراد مورد مطالعه برحسب نظر استفاده از تسهیلات بانکی. 79

 

جدول 4-11- توزیع فراوانی افراد مورد مطالعه برحسب نگرش در مورد کارآیی خدمات بانکداری الکترونیک.. 80

 

جدول 4-12- توزیع فراوانی افراد مورد مطالعه برحسب نگرش در مورد کامل بودن خدمات بانکداری الکترونیک 81

 

جدول 4-13- توزیع فراوانی افراد مورد مطالعه برحسب نگرش در مورد در دسترس بودن خدمات بانکداری الکترونیک   82

 

جدول 4-14- توزیع فراوانی افراد مورد مطالعه برحسب نگرش در مورد اعتماد به خدمات بانکداری الکترونیک 83

 

جدول 4-15- توزیع فراوانی افراد مورد مطالعه برحسب نگرش در مورد پاسخ­گویی خدمات بانکداری الکترونیک.. 84

 

جدول 4-16- توزیع فراوانی افراد مورد مطالعه برحسب نگرش در مورد رضایت از خدمات بانکداری الکترونیک 85

 

جدول 4-17- توزیع فراوانی افراد مورد مطالعه برحسب وفاداری به بانکداری الکترونیک.. 86

 

جدول 4-18- متغیرها، مقیاس متغیرها، ضریب همبستگی و سطوح معنی­داری آن­ها در جامعه آماری کشاورزان 89

 

جدول 4-19- خلاصه یافته­های استنباطی. 93

 

جدول 4-20- آزمون کلموگروف – اسمیرنف.. 94