پایان نامه ارشد:تاثیر باکتری Lactobacillus plantarum ( KC426951 ) جداسازی شده از روده قزل آلای رنگین کمان استان گیلان بر … |
1-1-5-بررسی آماری تولیدات پرورشی ماهی قزل آلا………………………………………………….. 12
1-2-پروبیوتیک چیست؟……………………………………………………………………………………….. 13
1-2-1-ضرورت استفاده از پروبیوتیک در آبزی پروری………………………………………………… 14
1-2-2-خطرات مصرف آنتی بیوتیک ها……………………………………………………………………. 16
1-2-3-نحوه ی عمل پروبیوتیک ها…………………………………………………………………………. 16
1-2-3-1-تولید ترکیبات ممانعت کننده…………………………………………………………………….. 16
1-2-3-2-رقابت بر سر مکان های اتصال…………………………………………………………………. 17
1-2-3-3-رقابت جهت جذب و مصرف مواد مغذی……………………………………………………. 17
1-2-4-معیارها و روشهای انتخاب پروبیوتیک……………………………………………………………. 18
1-2-4-1-جمع آوری اطلاعات زمینه ایی…………………………………………………………………. 19
1-2-4-2-تهیه پروبیوتیک…………………………………………………………………………………….. 19
1-2-4-3-ارزیابی توان پروبیوتیک در جهت خارج سازی سویه های بیماری زا………………….. 19
1-2-4-4-ارزیابی امکان بیماریزایی پروبیوتیک…………………………………………………………… 19
1-2-4-5-ارزیابی اثر پروبیوتیک بر میزبان………………………………………………………………… 20
1-2-4-6-تولید انبوه ، ارزیابی سود اقتصادی……………………………………………………………… 20
1-3- سیستم ایمنی در ماهیان………………………………………………………………………………….. 21
1-3-1-ایمنی غیر اختصاصی………………………………………………………………………………….. 21
1-3-1-1-ایمنی غیر اختصاصی (ترکیبات مایع )………………………………………………………… 22
1-3-1-1-1-لیزوزیم…………………………………………………………………………………………… 23
1-3-1-1-2-سیستم عامل مکمل (کمپلان ) در ماهیان………………………………………………….. 23
1-3-1-2-ایمنی غیر اختصاصی ( سلولی )……………………………………………………………….. 23
1-3-1-2-1-لنفوسیت ها……………………………………………………………………………………… 23
1-3-1-2-2-نوتروفیل ها……………………………………………………………………………………… 24
1-3-1-2-3-ائوزینوفیل ها……………………………………………………………………………………. 24
1-3-1-2-4-مونوسیت ها…………………………………………………………………………………….. 24
1-3-2-ایمنی اختصاصی……………………………………………………………………………………….. 24
1-3-2-1-ایمنی همورال……………………………………………………………………………………….. 25
1-3-2-1-1-ایمنوگلوبولین M (IgM)……………………………………………………………………. 25
1-3-2-2-ایمنی با واسطه ی سلولی ……………………………………………………………………….. 25
1-4-اهمیت مطالعات خون شناسی در ماهیان……………………………………………………………… 26
1-4-1-شاخص های خونی……………………………………………………………………………………. 26
1-4-1-1-گلبول های سفید (لکوسیت……………………………………………………………………… 26
1-4-1-2-گلبول های قرمز (اریتروسیت ، هموسیت )………………………………………………….. 26
1-4-1-3-شاخص های گلبول قرمز یا اندیس های خونی……………………………………………… 27
1-4-1-4-هماتوکریت………………………………………………………………………………………….. 27
1-4-1-5-هموگلوبین…………………………………………………………………………………………… 27
1-5-شاخص های بیوشیمیایی…………………………………………………………………………………. 27
1-5-1-پروتئین کل پلاسما و آلبومین……………………………………………………………………….. 27
1-5-2-گلوکز…………………………………………………………………………………………………….. 28
1-5-3-گلوتامیک پیرویک ترانس آمیناز……………………………………………………………………. 28
1-6-رابطه عوامل محیطی و میکروفلور دستگاه گوارش………………………………………………….. 28
1-7-باکتری های اسید لاکتیک (LAB)…………………………………………………………………….. 29
1-7-1-رده بندی علمی………………………………………………………………………………………… 30
فصل دوم: سابقه ی تحقیق
2- سابقه ی تحقیق……………………………………………………………………………………………….. 32
فصل سوم: مواد و روش ها
3-1-مکان و زمان انجام تحقیق……………………………………………………………………………….. 41
3-2-مکان پرورش……………………………………………………………………………………………….. 42
3-3-ذخیره سازی ، سازگاری و تقسیم بچه ماهیان……………………………………………………….. 43
3-4-پروبیوتیک مورد آزمایشLactobacillus plantarum………………………………………. 44
3-5-نحوه ی آماده سازی جیره غذایی……………………………………………………………………….. 44
3-6-زیست سنجی………………………………………………………………………………………………. 45
3-7-نحوه ی غذادهی……………………………………………………………………………………………. 45
3-8-بررسی عوامل فیزیکی و شیمیایی آب…………………………………………………………………. 46
3-9-بررسی پارامترهای خون شناسی………………………………………………………………………… 46
3-9-1-خون گیری و تهیه سرم……………………………………………………………………………….. 46
3-9-2-شاخص های خونی……………………………………………………………………………………. 47
3-9-2-1-شمارش گلبول های قرمز و سفید………………………………………………………………. 47
3-9-2-2-اندازه گیری هماتوکریت………………………………………………………………………….. 48
3-9-2-3-اندازه گیری هموگلوبین…………………………………………………………………………… 49
3-9-2-4-شاخص های گلبول قرمز………………………………………………………………………… 49
3-9-2-5-تشخیص افتراقی گلبول های سفید…………………………………………………………….. 50
3-10-فاکتورهای ایمنی…………………………………………………………………………………………. 51
3-10-1-شاخص های بیوشیمیایی ایمنی اختصاصی…………………………………………………….. 51
3-10-1-1-اندازه گیری ایمنو گلوبولینM (IgM)……………………………………………………… 51
3-10-2-شاخص های بیوشیمیایی ایمنی غیر اختصاصی……………………………………………….. 51
3-10-2-1-اندازه گیری فعلیت لیزوزیم……………………………………………………………………. 51
3-10-2-2-پروتئین کل سرم…………………………………………………………………………………. 52
3-11-روش انجام آزمایشات فلور باکتریایی روده در آزمایشگاه……………………………………… 52
3-11-1-روش آماده سازی محیط های کشت……………………………………………………………. 52
3-11-2-روش آماده سازی رقت های محلول روده و کشت اولیه…………………………………… 53
3-11-3-روش شمارش کلنی ها و تقسیم بندی آنها…………………………………………………….. 54
3-12-روش محاسبه شاخص های رشد…………………………………………………………………….. 54
3-12-1-اندازه گیری طول و وزن……………………………………………………………………………. 54
3-12-2-شاخص وضعیت…………………………………………………………………………………….. 55
3-12-3-درصد افزایش وزن………………………………………………………………………………….. 55
3-12-4-ضریب تبدیل غذایی………………………………………………………………………………… 55
3-12-5-ضریب رشد ویژه……………………………………………………………………………………. 55
3-12-6-میانگین رشد روزانه…………………………………………………………………………………. 55
3-12-7-شاخص کبدی………………………………………………………………………………………… 56
3-13-آماده سازی لاشه جهت تجزیه شیمیایی ……………………………………………………………. 56
3-14-تجزیه و تحلیل آماری………………………………………………………………………………….. 56
فصل چهارم: نتایج
4-نتایج………………………………………………………………………………………………………………. 58
4-1-نتایج حاصل از اندازه گیری عوامل محیطی…………………………………………………………… 58
4-1-1-دمای آب………………………………………………………………………………………………… 58
4-1-2-اکسیژن محلول آب……………………………………………………………………………………. 58
4-1-3-pH آب محیط پرورش……………………………………………………………………………… 58
4-2-نتایج حاصل از عملکرد رشد بچه ماهیان قزل آلا تحت تاثیر سطوح مختلف پروبیوتیک….. 59
4-2-1-اثر بر وزن نهایی……………………………………………………………………………………….. 59
4-2-2-اثر بر طول نهایی……………………………………………………………………………………….. 59
4-2-3-اثر بر ضریب تبدیل غذایی…………………………………………………………………………… 60
4-2-4-ضریب رشد ویژه………………………………………………………………………………………. 60
4-2-5-درصد افزایش وزن……………………………………………………………………………………. 61
4-2-6-میانگین رشد روزانه……………………………………………………………………………………. 61
4-2-7-میزان ضریب چاقی……………………………………………………………………………………. 62
4-3-فلور باکتریایی روده ماهیان تیمار و شاهد…………………………………………………………….. 62
4-3-1-میزان باکتریL.p در فلور روده قزل آلا در محیط کشت MRS…………………………… 62
4-3-2-توتال کانت باکتریایی روده ماهی قزل آلای رنگین کمان در محیط کشتTSA ……….. 62
4-4-نتایج حاصل از فاکتورهای خونی………………………………………………………………………. 63
4-4-1-تعداد گلبول های سفید خون………………………………………………………………………… 63
4-4-2-تعداد گلبول های قرمز خون…………………………………………………………………………. 64
4-4-3-غلظت هموگلوبین خون………………………………………………………………………………. 64
4-4-4-درصد هماتوکریت خون……………………………………………………………………………… 65
4-4-5-متوسط حجم گلبول قرمز…………………………………………………………………………….. 65
4-4-6-متوسط غلظت هموگلوبین سلولی………………………………………………………………….. 66
4-4-7-متوسط هموگلوبین گلبول قرمز……………………………………………………………………… 66
4-4-8-درصد لنفوسیت………………………………………………………………………………………… 67
4-4-9-مقادیر نوتروفیل………………………………………………………………………………………… 67
4-4-10-درصد منوسیت……………………………………………………………………………………….. 68
4-4-11-درصد ائوزینوفیل…………………………………………………………………………………….. 68
4-5-نتایج فاکتورهای سرم……………………………………………………………………………………… 68
4-5-1-میزان توتال ایمنوگلوبولین سرم خون………………………………………………………………. 69
4-5-2-میزان IgM……………………………………………………………………………………………… 69
4-5-3-میزان لیزوزیم سرم خون……………………………………………………………………………… 70
4-6-نتایج آنالیز لاشه…………………………………………………………………………………………….. 70
4-6-1-درصد رطوبت لاشه……………………………………………………………………………………. 70
4-6-2-درصد پروتئین لاشه…………………………………………………………………………………… 71
4-6-3-درصد چربی لاشه……………………………………………………………………………………… 71
4-6-4-درصد خاکستر لاشه…………………………………………………………………………………… 72
فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری
5-بحث……………………………………………………………………………………………………………… 74
5-1-عملکرد رشد………………………………………………………………………………………………… 74
5-2-فلور باکتریایی روده……………………………………………………………………………………….. 77
5-3-شاخص های خونی……………………………………………………………………………………….. 78
5-4-شاخص های ایمنی خون…………………………………………………………………………………. 81
5-4-1-لیزوزیم…………………………………………………………………………………………………… 81
5-4-2-ایمنوگلوبین IgM……………………………………………………………………………………… 83
5-5-آنالیز لاشه……………………………………………………………………………………………………. 84
5-6-جمع بندی…………………………………………………………………………………………………… 86
پیشنهادات ………………………………………………………………………………………………………….. 87
منابع………………………………………………………………………………………………………………….. 88
پیوست………………………………………………………………………………………………………………. 107
چکیده انگلیسی……………………………………………………………………………………………………. 121
فهرست جداول
عنوان صفحه
جدول 3-1: آنالیز تقریبی خوراک استفاده شده در تغذیه بچه ماهیان مورد آزمون………………….. 44
جدول4-1: میانگین دما، اكسیژن محلول و pH آب در مقاطع زمانی مشخص در طول دوره بررسی 58
جدول 4-2- میانگین وزن نهایی (گرم) در بچه ماهیان قزل آلا در تیمارهای مختلف……………. 59
جدول 4-3- میانگین طول نهایی (سانتیمتر) در بچه ماهیان قزل آلا در تیمارهای مختلف………. 59
جدول 4-4- میانگین ضریب تبدیل غذایی بچه ماهیان قزلآلا در تیمارهای مختلف………………. 60
جدول4-5- میانگین ضریب رشد ویژه بچه ماهیان قزلآلا در تیمارهای مختلف……………………. 60
جدول4-6- میانگین درصد افزایش وزن بچه ماهیان قزلآلا در تیمارهای مختلف…………………. 61
جدول 4-7- میانگین رشد روزانه بچه ماهیان قزلآلا درتیمارهای مختلف…………………………… 61
جدول 4-8- میانگین میزان ضریب چاقی بچه ماهیان قزلآلا درتیمارهای مختلف…………………. 62
جدول 4-9-میزان پروبیوتیک (لاکتوباسیلوس) در روده ماهیان قزل آلا در محیط کشت MRS.. 62
جدول4-10-شمارش کلی فلور باکتریایی در روده ماهیان قزل آلا در محیط کشت TSA……… 63
جدول 4-11-تعدادگلبول های سفید خونی قزل آلا در تیمارهای شاهد وآزمایشی در پایان60روز 63
جدول 4-12-تعدادگلبول های قرمز خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان60روز 64
جدول 4-13- غلظت هموگلوبین g/dl)) خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان60
روز……………………………………………………………………………………………………………………. 64
جدول 4-14- درصد هماتوکریت % خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز 65
جدول 4-15- متوسط حجم گلبول قرمز خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60
روز………………………………………………………………………………………………………………….. 65
جدول 4-16- متوسط غلظت هموگلوبین سلولی خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان
60 روز…………………………………………………………………………………………………………….. 66
جدول 4-17- متوسط هموگلوبین گلبول قرمز خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان
60 روز…………………………………………………………………………………………………………….. 66
جدول4-18- درصد لنفوسیت خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز…. 67
جدول4-19-درصد نوتروفیل خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز….. 67
جدول4-20-درصد منوسیت خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز…… 68
جدول4-21-درصد ائوزینوفیل خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز… 68
جدول4-22-توتال ایمنوگلوبولین سرم خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60
روز………………………………………………………………………………………………………………….. 69
جدول4-23-میزان IgM سرم خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز.. 69
جدول4-24-میزان لیزوزیم سرم خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز. 70
جدول4-25-درصد رطوبت لاشه قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز…… 70
جدول4-26-درصد پروتئین لاشه قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز…… 71
جدول4-27-درصد چربی لاشه قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز…….. 71
جدول4-28-درصد خاکستر لاشه قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز…. 72
فهرست شکل ها
عنوان صفحه
شكل( 1-1) ماهی قزل آلای رنگین كمان ” Oncorhynchus mykiss”…………………………. 13
شکل (1-2) رابطه عوامل محیطی و میکروفلور دستگاه گوارش………………………………………… 29
شکل (3-1) موقعیت جغرافیایی گارگاه پرورش ماهی سردابی(قزل آلا) اشکرآب سیاهکل……… 41
شکل (3-2) نمایی از کارگاه پرورش ماهی سردابی اشکراب سیاهکل………………………………… 42
شکل (3-3) نمایی از کانال های بتونی پرورش و تیمار و تکرارها……………………………………. 43
شکل(3-4) پودر اولیه حاوی1011-1012…………………………………………………………………… 44
شکل(3-5) رقت های مختلف از106-1010………………………………………………………………. 44
شکل(3-6) غذای آماده و غنی شده با پروبیوتیک…………………………………………………………. 45
شکل (3-7) غذادهی روزانه بر اساس محاسبات روزانه………………………………………………….. 46
شکل (3-8) خونگیری از سیاهرگ در محل ساقه دمی…………………………………………………… 46
شکل (3-9) دستگاه سانتریفوژ و نحوه ی جداسازی سرم خون………………………………………… 47
شکل (3-10) دستگاه سانتریفیوژ هماتوکریت………………………………………………………………. 48
شکل (3-11) دستگاه اسپکتروفتو متر نور مرئی و UV…………………………………………………… 49
شکل(3-12): دستگاه اسپکتروفتومتر مدل 2100-VIS شرکت Unico آمریکا…………………….. 51
شکل(3-13)دستگاه Auto Analyzer مدلBT- 1500……………………………………………. 52
شکل (3-14) نحوه ی آماده سازی محیط کشت TSA و MRS آگار………………………………… 53
شکل (3-15) برداشت روده و تهیه رقت های مختلف و کشت در پلت های TSAو MRS…… 54
شکل (3-16) نگهداری پلت ها در انکوباتور و شمارش باکتری ها…………………………………… 54
شکل (3-17) آماده سازی لاشه جهت تجزیه شیمیایی…………………………………………………… 56
چکیده
فرم در حال بارگذاری ...
[سه شنبه 1399-10-09] [ 02:33:00 ب.ظ ]
|