2-5-1 پراکنده شدن…………………………………………………….. 18

 

2-5-2 پخش شدن مواد نفتی در سطح آب………………………….. 18

 

2-5-3 حل شدن………………………………………………………… 18

 

2-5-4 تبخیر شدن……………………………………………………… 18

 

2-5-5 اکسیداسیون فتوشیمیایی……………………………………. 18

 

2-5-6 بحالت امولسیون در آمدن…………………………………….. 19

 

2-5-7 قابلیت تجزیه زیستی………………………………………….. 19

 

2-5-8 ته نشین شدن………………………………………………… 19

 

2-6- تجزیه‌زیستی………………………………………………………20

 

2-7- معرفی هیدروکربن‌های آروماتیک………………………………. 20

 

2-7-1 طبقه‌بندی ترکیبات آروماتیک…………………………………. 20

 

2-7-2 فرمولاسیون ترکیبات آروماتیک……………………………….. 21

 

2-7-3 خواص فیزیکی و شیمیایی…………………………………… 22

 

2-7-4 درجه سمیت ترکیبات آروماتیک……………………………… 23

 

2-7-5 اثرات هیدروکربن‌های پلی‌آروماتیک روی سلامتی انسان‌ها و موجودات زنده….27

 

2-7-6 هیدروکربن های پلی سیکلیک آروماتیک و سرطان……….. 27

 

2-7-7 چه عاملی ترکیب را سرطان‌زا می‌کند؟……………………. 27

 

2-8- فنل……………………………………………………………….. 28

 

2-8-1 کلیات ترکیب فنل………………………………………………. 28

 

2-8-2 نام‌گذاری……………………………………………………….. 28

 

2-8-3 فنول‌های طبیعی……………………………………………… 29

 

2-8-4 ساختمان مولکولی و خواص فیزیکی………………………. 29

 

2-8-5 خواص فیزیکی………………………………………………… 29

 

2-8-6 تأثیر فنل بر محیط زیست و موجودات زنده…………………..30

 

2-8-7 کاربردها………………………………………………………… 30

 

2-9- تجزیه‌زیستی……………………………………………………. 30

 

2-9-1 روش‌های پاکسازی بیولوژیکی…………………………….. 31

 

2-9-2 مبانی زیست‌درمانی…………………………………………. 32

 

2-9-3 میکروارگانیسم‌های هوازی…………………………………… 32

 

2-9-4 میکروارگانیسم‌های بی‌هوازی………………………………. 32

 

2-9-5 مخمرها و قارچ‌ها……………………………………………… 33

 

2-9-6 استفاده از بیوراکتور‌ها……………………………………….. 33

 

2-9-7 کو‌متابولیسم………………………………………………….. 34

 

2-9-8 دی‌نیتریفیکاسیون……………………………………………..34

 

2-9-9 کمپوست کردن……………………………………………….. 34

 

2-9-10 درمان بیولوژیکی……………………………………………. 34

 

2-10- میکروارگانیسم های تجزیه کننده ترکیبات آروماتیک……….35

 

2-11- مسیر های تجزیه زیستی………………………………….. 36

 

2-11-1 تجزیه میکروبی فنل…………………………………………. 36

 

2-11-2 تجزیه میکروبی نفتالین…………………………………….. 39

 

فصل سوم: روش شناسی تحقیق

 

 

3-1- محیط کشت‌های مورد استفاده……………………………… 44

 

3-1-1 محیط ONR7a………………………………………………….

 

3-1-2 محیط (ONR7a + نفتالین) آگار………………………………. 45

 

3-1-3 محیط) +ONR7a فنل( آگار……………………………………. 45

 

3-1-4 محیط مارین براث (MB)……………………………………….. 45

 

3-1-5 محیط مارین آگار (MA)………………………………………… 46

 

3-1-6 محیط نوترینت براث (NB)……………………………………… 46

 

3-1-7 محیط نوترینت آگار (NA)……………………………………… 46

 

3-2- محلول‌ها………………………………………………………… 47

 

3-2-1 سرم فیزیولوژی……………………………………………….. 47

 

3-2-2 محلول اتیلن‌دی‌‌آمینو‌تترا‌استیک‌اسید (EDTA)…………….. 47

 

3-2-3 محلول Tris-Base……………………………………………..

 

3-2-4 محلول TBE……………………………………………………

 

3-2-5 محلول   EDTA Tris-Base- (TE)……………………………

 

3-2-6 محلول اتیدیوم بروماید……………………………………….. 48

 

3-3- مواد مصرف شده در PCR……………………………………..

 

3-4- دستگاه‌های مورد استفاده……………………………………. 49

 

3-5- روش عملی…………………………………………………….. 50

 

3-5-1 نمونه برداری به منظور جداسازی باکتری های تجزیه کننده…50

 

3-5-2 شمارش باکتری های موجود در محیط…………………….. 51

 

3-5-2-1 شمارش باکتری های هتروتروف………………………….. 51

 

3-5-2-2 شمارش باکتری‌های تجزیه‌کننده نفتالین……………….. 51

 

3-5-2-3 شمارش باکتری‌های تجزیه‌کننده فنل……………………. 51

 

3-5-3 جداسازی باکتری های تجزیه کننده………………………… 51

 

3-5-3-1 جداسازی و غربالگری باکتری های  تجزیه کننده………..51

 

3-5-3-2 تست های تکمیلی………………………………………. 52

 

3-5-3-2-1 سنجش رشد باکتری………………………………….. 52

 

3-5-3-2-2 فعالیت امولسیون‌کنندگی (E24)……………………… 52

 

3-5-3-2-3  سنجش حذف فنل…………………………………….. 52

 

3-5-3-2-4 سنجش حذف نفتالین………………………………….. 52

 

3-5-4 شناسایی باکتری ها………………………………………… 53

 

3-5-4-1 استخراج DNA ژنومی با روش فنل کلروفورم……………. 53

 

3-5-4-2 تعیین غلظت DNA استخراج شده……………………….. 54

 

3-5-4-3 برنامه وغلظت مواد مورد استفاده در PCR……………….

 

3-5-4-4 بررسی محصول PCR……………………………………….

 

3-5-4-5BLAST  کردن نتایج حاصل از توالی یابی نوکلئوتیدی نمونه ها…..55

 

 فصل چهارم: نتایج یافته های تحقیق

 

4-1- نمونه برداری………………………………………………….. 57

 

4-2- شمارش باکتری ها…………………………………………… 58

 

4-2-1 شمارش تعداد کل هتروتروف‌ها……………………………. 58

 

4-2-2 شمارش تعداد کل تجزیه کننده‌ها…………………………. 60

 

4-3- نکات ایمنی جهت استفاده از فنل و نفتالین……………… 61

 

4-4- جداسازی میکروارگانیسم های تجزیه کننده……………… 62

 

4-4-1 کشت نمونه‌ها در محیط ONR7a به اضافه فنل جهت جداسازی باکتری‌های تجزیه‌کننده فنل…..62

 

4-4-2 کشت نمونه‌ها در محیط ONR7a به اضافه نفتالین جهت جداسازی باکتری‌های تجزیه کننده نفتالین…..62

 

4-5- تست‌های تکمیلی جهت انتخاب باکتری‌هایی با توان بالای تجزیه فنل و نفتالین…..63

 

4-5-1 سنجش میزان رشد باکتری های تجزیه کننده فنل و نفتالین…63

 

4-5-2 فعالیت امولسیون کنندگی (E24)……………………… 67

 

4-5-3 سنجش حذف ترکیبات آروماتیک……………………….. 71

 

4-5-3-1 سنجش حذف نفتالین………………………………… 71

 

4-5-3-2 سنجش حذف فنل……………………………………… 73

 

4-6- شناسایی مولکولی نمونه های تجزیه کننده ترکیبات آروماتیک….75

 

4-6-1 بررسی محصول PCR………………………………………

 

4-6-2 BLAST کردن توالی نوکلئوتیدی نمونه ها……………….. 76